1GFP-mTn嵌合基因对蓝猪耳的遗传转化及融合蛋白在蓝猪耳中的表达.pdf

摘要 植物细胞中的微丝骨架，是细胞内的一个由蛋白质构成的动态网络结构，参与胞内诸多 的重要的生理活动。依赖各种actin结台蛋闩的调：¨，微丝骨架可以受到高度严密的调控， 从而在时间和空间上发生快速的重组。 配同时还可以和Vineu|in及其它的aetin结合蛋白以及粘着斑上的蛋白相结合。 丝结合蛋白Talin的微丝结合域，可以显示活体细胞中微丝的结构)导入拟南芥后，发现表达的 融合蛋白能够标记微丝骨架，同时叉不影响植物细胞的正常形态和功能。 蓝猪耳在其发育的四核期，胚囊从璩孔端伸出，当胚囊完全成熟时，助细胞、卵细胞和 大部分中央细胞均暴赡于胚珠组织之外，是研究被子植物受精和胚囊发育的模式植物。我们 将嵌合基因gfp：mtn通过叶盘法导入蓝猪耳，探索了蓝猪耳遗传转化的方法和转基因苗的再生 条件，建立了成熟的蓝猪耳转化系统。经激光共聚焦显微镜观察了转基因植株的各种不同组 纵中融合蛋白的表达和分布情况。在叶片的表皮细胞、保卫细胞、根部的皮层细胞中有融合 蛋白的表达，保卫细胞中微丝标记状况良好，经光诱导处于开放态的气孔的保卫细胞微丝呈 网状结构。在细胞内无规则分布：经黑暗诱导处于关闭态的气孔保卫细胞中微丝束沿保卫细 胞纵轴排列，呈卷曲状分布。只有极少数的转基因植株在表皮细胞和根皮层细胞中有目的基 因的表达。在转基因植株的其它部位，例如茎表皮细胞、根毛细胞和花粉粒中，未检测到目 的基因的表达。 我们将外源基因成功地导入蓝猪耳，为利用转基因的手段研究被子植物受精和胚囊发育 打下基础。获得的转基因植株也可以作为研究气孔运动过程中微丝动态变化的材料。 关键词：微丝，绿色荧光蛋白，Talin，蓝猪耳 Abstract Theactin networkof structural c”oskeleton，a intracellular elements dynamic proteinaceous in activitiesin cell．Theactin and many plant cytoskeletonpolymerization participatesphysiological depolymerizationisregulatedbyanumberofactin—binndingprotein and rapidly spatio-temporally． talinare Talinisa F-actin ofintact the functions controlofactin importantbindingprotein，Two andthe ofactin totalin filament ofF-actin length cross-linkingpolymers．Thebinding significantly actin and increasesfilamentstiffness．Inaddtion nucleatesacfin bindsto to，Talin assembly vinculins andahostofactin andother