骨髓基质细胞诱导神经干细胞分化的蛋白质的微阵列分析.pdfVIP

中文摘要 骨髓基质细胞诱导神经千细胞分化的 蛋白质的微阵列分析 摘 要 目的：神经干细胞(NeuralStem 分化为神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力， 等于1992年首次从成年动物脑中培养出了具有NSCs特性的 细胞，之后科学家发现成人的中枢和外周神经系统中都有 NSCs的存在，NSCs的出现为神经退行性疾病如帕金森病、 阿尔茨海默病的功能重建以及神经系统损伤如脑、脊髓损伤 的修复带来了希望。但无论是体外还是体内研究的结果， NSCs分化为神经元的比例都明显低于胶质细胞，致使难以达 到理想的替代因损伤和疾病等原因造成的神经元缺失的目 MarrowStromalCells，BMSCs) 的。骨髓基质细胞(Bone 是来源于骨髓的多潜能干细胞，体外培养具有粘附特性及克 隆样增殖特征，其主要功能是支持和营养造血细胞。近年来 研究发现BMSCs能分泌许多具有神经保护和修复作用的细 胞因子，如脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维生 素(IL)、转化生长因子(n师)等，而且这些细胞因子对 NSCs的存活、增殖以及分化也有一定影响。我们已证实 BMSCs分泌至培养液中的可溶性分子(如细胞因子等)在这 一过程中发挥了重要作用，但究竟是什么可溶性分子在起作 中文摘要 Neurobasal 的条件培养液(臣[J ConditionedMedium，N．CM)， 将其分段之后分别培养NSCs，初步筛选出对NSCs分化具有 调节作用的BMSCs条件培养液，再经过含有19种大鼠细胞因 子抗体的蛋白质微阵列检测，确定了其中所含的部分细胞因 子，初步探讨了BMSCs调节NSCs分化的机制。 方法：常规方法提取SD青年期大鼠BMSCs以及新生大 细胞铺满瓶底面积的约85％后，弃培养液，更换为Neurobasal 培养液6ml，培养24h后收集上清，离心后上清液即为 (3) 分化第3天进行细胞免疫化学染色并在荧光显微镜下观察细 胞生长状态，并且通过细胞计数确定其中能调节NSCs分化的 部分进行大鼠细胞因子抗体芯片检测。结果采用SPSSl3．0统 计软件处理，所有计量资料采用均数±标准差表示，各组之 间采用t检验进行显著性分析。 组：细胞总体生长状况很差，细胞核多有固缩、破碎，MAP．2 阳性的神经元稀少，而且突起不明显，神经元大多聚集在干 细胞球的周围。NG2阳性的少突胶质细胞突起长度较短。 中文摘要 长状况较好，胞核比较均一，很少有破碎，MAP．2阳性的神 少突胶质细胞突起较长，荧光着色较亮。GFAP阳性的星形 况良好，细胞核大小均一、饱满，MAP．2阳性的神经元占多 数，着色明显，突起较长，神经元大多可以迁移到离干细胞 球较远的距离。NG2阳性的少突胶质细胞突起较长，荧光着 (4) 色更亮。GFAP阳性的星形胶质细胞数量较少。 N．CM5I①a组：细胞生长状况极差，第3天染色时大部分 细胞已死亡，未进行细胞染色。 2．各组细胞计数以及统计学结果：(1)分化为MAP．2阳 在这一过程中起主要作用。(2)分化为NG2阳性的少突胶质 细胞的计数：N．CM组NSCs分化为少突胶质细胞的比例 差异，说明N．CM可以诱导NSCs向少突胶质细胞方向，并 中文摘要 Neurobasal组(37．99±1 统计学差异(矿O．61 的分化为星形胶质细胞有抑制作用。 3．蛋白质微阵列分析使用含有19种细胞因子抗体的 蛋白质微阵列检测N．CM大于5KDa组和对照组 中性粒细胞趋化因子一3、睫状神经营养因子、干扰素一¨ 白细胞介素一l0c、单核细胞的趋化蛋白一1、金属蛋白酶组 织抑制剂一l和血管内皮生长因子。没有表达下调的细胞因 子。 初步探讨了BMSCs调