溶藻弧菌诱导红笛鲷仔鱼差减文库构建及其表达序列标签分析.pdf

溶藻弧菌诱导红笛鲷仔鱼差减文库的构建 及其表达序列标签分析 摘要 本论文以灭活溶藻弧菌诱导的红笛鲷仔鱼为研究对象，选择仔鱼母源抗体完全降 解，而其自身免疫尚未完全建立这段“特异性免疫应答无能期，通过抑制消减杂交 技术(SSH)，构建了诱导组和对照组的eDNA差减文库，并对与红笛鲷仔鱼抗菌免疫 和免疫系统成熟相关功能基因的表达序列标签(ESTs)进行了分析。 本研究以灭活溶藻弧菌(1．0x108 经检测文库容量为2×106个克隆，蓝白斑检验表明重组率为90％，PCR检测表明目的 片段大多分布在0．3～1．Okb之间，符合建库要求。通过对1000个随机筛选的克隆进行 测序，共获得ESTs 质数据库中的蛋白质序列存在一定相似性，50个ESTs序列与数据库中的蛋白质序列 本论文的研究结果为探讨红笛鲷仔鱼免疫防御相关功能基因的作用机理和调控 机制奠定了坚实的基础，丰富和发展了仔鱼分子免疫学的研究内容，对于全面了解和 认识红笛鲷仔鱼免疫防御的分子机制，具有重要的理论指导意义。 关键词：溶藻弧菌，抑制性差减杂交(SSH)，表达序列标签(EST)，红笛鲷 Constructionand ofthe ESTS Analysis SubtractionCDNA forLarvaeof Library InducedV／brio Lut]anussanguineusby - - - ■ algtnolyacus Abstract tothe have According work，wedemonstratedthematernal of previous antibody Lutjanus wouldbe in7 hatchwhenthe sanguineus fullydegradeddayspost specific immune hadnotbeen atthattime．Toevaluatetheimmune of response developed response thelarvaewillbenefitforthe researchon thesurvivalrate the improving duringearly inmariculturefor a constructthesubtractioncDNA result，we stages L．sanguineus．As ofthelarvaefish of inducedthebacteria library L．sanguineusby subtractive alginolyticusbysuppression immune—relatedESTsweredelineatedb