以组织蛋白酶K为靶点的新药筛选模型的建立和应用.pdfVIP

中文摘要 K)是半胱氨酸蛋白酶家族的成员，在人的破骨细 组织蛋白酶K(Cathepsin 胞中选择性的大量表达。现已证明组织蛋白酶K是参与骨胶原降解的主要酶， 在骨代谢中起关键的作用，是骨质疏松症发生的主要原因之一。因此近年来，国 内外对组织蛋白酶K的结构与功能做了很多研究，组织蛋白酶K现已成为治疗 骨质疏松症的重要分子靶标。 为寻找治疗或缓解严重影响人们生活质量的骨质疏松症的新药，本论文建立 了以组织蛋白酶K为靶点的新药筛选模型，并对本室的微生物产物库和化合物 库进行高通量筛选，以期得到组织蛋白酶K抑制剂的先导化合物。 本研究中，采用IPTG诱导组织蛋白酶K表达工程菌一一含有重组质粒 pEK43的E．ColiBL21(DE3)表达组织蛋白酶K，所表达的蛋白是以包含体的形式 存在于菌体内，将菌体裂解后进行SDS电泳来检测蛋白的表达量， western blot方法检测目的蛋白的存在与否。本论文还研究和优化了蛋白的表达 培养基为MH培养基。 组织蛋白酶K的纯化，是首先将包含体经盐酸胍或尿素等变性剂处理，使 I-IP柱亲和层析纯化后，可以 形成带有Histag的