转染IL-21结肠癌细胞瘤苗的制备及其抗肿瘤效应的初步研究.pdf

中文摘要 转染IL一21结肠癌细胞瘤苗的制备 及其抗肿瘤效应的初步研究 摘 要 目的：IL一2l是新近发现的I类细胞因子。它可以通过调 节机体的免疫力来对某些肿瘤细胞产生杀伤作用。目前已成 为肿瘤基因治疗中一个新的候选目的基因。把IL．21基因转 染到鼠结肠癌细胞中构建重组细胞，将该细胞注射给裸鼠， 结果发现肿瘤细胞生长缓慢，提示IL．21可以影响肿瘤细胞 的生长。 因此本研究拟用同位素C060照射方法给予已成功 转染IL．21的Colon26细胞致死剂量的照射使其失去致瘤 性，制备成仍保留有抗肿瘤活性的转基因瘤苗。通过与未照 射亲株细胞的对比，观察其生物学性状及抗肿瘤效应的差 异。以期为今后结肠癌的基因治疗提供理论依据。 方法：将Colon 26／IL一21细 射后制备成瘤苗；在光镜下观察照射前后colon 胞形态学的改变；采用细胞计数法、MTT法测定出经50Gy C060照射后Colon26／IL．21细胞瘤苗的生长情况并比较照射 前后此细胞株的生长活力和细胞增殖的变化，并且在照射后 的不同时间点采用ImPCR的方法检测IL．21基因的转录情 况、比较其在不同的时间点量的变化：采用流式细胞分析方 法检测经50GyC060照射后Colon26／IL．21细胞瘤苗的凋亡 率、细胞周期改变、增殖活力情况；采用ELISA法测定Colon 26／IL．21细胞瘤苗、 C060照射后Colon 2鲫L．2l细胞、经50Gy 26细胞与BALB／c小鼠脾细胞共 经50(时C060照射后Colon 培养其上清液中分泌的IFN叫水平变化；将制备好的Colon 中文摘要 连续观察其致瘤性及抑制同源基因鼠结肠癌细胞肿瘤生长 的作用。 结果：l通过用同位素C060照射方法给予50G哆剂量于 Colon 26／IL．21细胞，采用细胞计数、MTT方法证明瘤苗的 生长和增殖活力受到抑制，Col蚰26／IL．21细胞其倍增时间 大约是2．1天，而照射后的colon26／IL．21细胞经过4天培 养后其细胞数目减少了一半，此瘤苗在5天后只有大约50％ 的细胞保持代谢活力，7天后只有大约30％细胞保持代谢活 力；通过流式细胞技术方法测定实验组(照射后的Colon 2觎L．2l细胞培养第4天)和对照组(Colon26／IL。2l细胞) 凋亡率、增殖指数、细胞周期分布，实验组凋亡率、增殖指 实验组的细胞产生明显的G1期阻滞(G1期细胞百分比为 百分比为31．27l士0．757％)相比显著减少、并且有显著性差 26／IL一2l细胞 异(P0．01)；通过RT-PCR的方法检测Colon 瘤苗IL一21基因在第1、3、5天时仍然还有转录产物并且其 量呈递减趋势：通过此三方面的证据可以说明照射后的 Colon26／】[L．2l细胞增殖受到抑制，50％的细胞在4天后仍然 有代谢活性，其目的基因IL．21仍然有转录。接种l×106个 2觎L．21细胞瘤苗细胞于实验组小鼠脚垫，7 照射后的Colon 天后观察局部无肿瘤细胞生长的迹象、连续观察45天局部 中文摘要 未见肿瘤细胞生长。 2制备成Colon 26／IL．21细胞瘤苗后将瘤苗的抗肿瘤具 体效应分为体内、体外两方面：(1)不同刺激原作用下，小 鼠脾细胞共培养其上清液中IFN．Y平均含量。实验中证明 Colon 2觚L一21细 平均含量为23．767士3．123p∥ml，照射后的Colon 胞与小鼠脾细胞共培养其上清液中IFN吖平均含量为 照射后的C