活力的测定.pptVIP

酶 工 程 主讲：王素芳 酶赋予了生命 生产各种产品 产品 第一章 绪论 第一节 酶的基本知识 第二节 酶工程概况 第一节 酶的基本知识 一、酶的概念 二、酶的特点 三、酶的命名 四、影响酶催化作用的因素 五、酶活力测定 一、酶的概念 酶是一类具有催化功能的生物大分子， 亦称生物催化剂 。 酶促反应： 底物： 产物： 酶的“活性”： 酶失活： 二、酶的特点 （一）催化作用的特点 1、效率高 使反应速度提高10７ –101３倍，比化学催化剂效率要高106-1012倍。如过氧化氢酶 2、专一性强：催化一种或一类结构相似的底物 3、条件温和：常温、常压、pH近中性 （二）其他特点 1、易失活 “娇小姐”，有些例外 2、酶活力可调节 温度、pH、抑制剂、 激活剂 三、酶的分类及命名 （一）蛋白类酶 1、推荐名 主要底物＋催化反应类型＋酶 如草酸氧化酶、乙酰辅酶A水解酶 （2）系统编号 四码编号： 如ATP：葡萄糖磷酸转移酶 [EC 2.7.1.1] 国际酶学委员会 酶的大类(转移酶类) 亚类(磷酸转移酶类) 小类(以羟基作为受体) 小类中的排号(D葡萄糖作为磷酸基的受体) （二）核酸类酶的分类及命名 1、酶催化反应类型： 剪切酶 剪接酶 多功能酶 2、酶的结构特点 锤头型R酶 发夹型R酶 含Ⅰ型IVS R酶 3、根据底物是否其本身 分子内催化 分子间催化 四、影响酶催化作用的因素 1、底物浓度 低浓度：v=k[S]， 高浓度： v＝Vmax 应用：控制[E]足够大，测底物浓度 2、酶浓度 当[S]足够大，v=k[E] 应用：控制[S]足够大，测酶浓度 3、温度 有效温度范围：才能催化 一般酶﹤60℃ 最适温度： 反应速度最大 4、pH值 有效pH范围 最适pH 5、抑制剂 6、激活剂 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+、 Zn2+、Se3+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 有机分子 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸 金属螯合剂：EDTA 大分子物质：激活酶原的物质 五、酶活力测定 （一）酶活力：酶量 一定条件下，酶催化反应的初速度。 单位时间内底物的 减少量或产物的增 加量表示: （二）酶活力单位（IU） 在特定条件下，每分钟催化1?mol底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位。1IU=?mol/min （三）酶比活力：酶纯度 特定条件下，单位质量酶（mg）具有的酶活力。 酶比活力＝酶活力（单位）/mg （四）例题 1、在37℃，pH7.0的条件下，将浓度为0.5mol/L的底物溶液5ml与5ml酶液混合反应，准确反应10min用三氯醋酸终止，测得底物浓度为0.01mol/L，求5ml酶液的酶活力，求每毫升酶液的酶活力。 酶活力单位的定义：在上述条件下，每分钟催化1?mol底物转化为产物的酶量。 解： （1）5ml酶液的酶活力 酶活力＝底物减少量/t ＝[(0. 5×5×10-3 –0.01×10×10-3 ) ×106]/10 ＝240（U） （2）每毫升的酶活力 酶比活力＝酶活力/V ＝240/5 ＝48(U/ml) 例2、有一袋500g的酶制剂，取1g酶溶于1000ml缓冲液中制得酶液，再取1ml酶液在37℃的条件下与5ml pH7.0 0.05mol/L的底物溶液混合，准确反应10分钟终止反应。测得底物浓度为0.02mol/L，问1ml酶液的酶活力是多少？那1g酶的酶活力呢？该袋酶的酶活力及比活力呢？ （注：酶活力单位（U）定义：在37℃ pH7.0的条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位。） 解： （1）底物减少量： （0.05×5×10－3－0.02×6×10－3）×106 ＝130μmol 1ml酶液的酶活力： 酶活力＝底物减少量/t＝130/10＝13U/ml （2）1g酶的酶活力：酶活力