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恶性肿瘤的分子靶向治疗Targeting Molecular Therapy for Malignant tumors 中南大学肿瘤研究所 向娟娟 (xiangjj@csu.edu.cn) 靶向治疗： 药物有针对性地瞄准预期的靶位，而不伤及其他正常细胞、组织或器官。 靶向治疗分三个层次：器官靶向、细胞靶向和分子靶向 分子靶向的分类 基因治疗 细胞信号转导通路 肿瘤抗原 细胞因子 肿瘤血管生成 内分泌治疗 背景 （background) 传统的治疗方式有一定的限制（手术治疗，化疗，放疗）。 分子靶向治疗（molecular targeted therapy)受到密切的关注。 基因治疗是分子治疗的一种手段，有很大的应用前景。 Dr Anderson（1980）首先阐明基因治疗前景和发展方向 我国是世界上较早开展基因治疗研究的国家之一 1991年，我国科学家进行了世界上首例B型血友病患者的基因治疗临床试验。 2003年世界首个基因治疗药物在我国获准生产的新药：拥有自主知识产权的重组人p５３腺病毒注射液 基因治疗概念 将具有正常功能的基因（人的正常基因或有治疗作用的基因）通过一定方式导入人体靶细胞，置换、增补或抑制患者体内有缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的。 基因治疗的基本方式 基因置换 （gene replacement） 基因增补 （gene augmentation） 基因失活 （gene inactivation） 基因置换（gene replacement） 定义：所谓基因置换,是指目的基因导入靶细胞后,通过目的基因与靶细胞内染色体上内源DNA序列间的交换,将目的基因定点整合到靶细胞基因组上某一确定位点的技术，置换原有的缺陷基因，使致病基因永久地得到更正。 目的：将缺陷基因的异常序列进行矫正。对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复。 目前的技术水平难以达到 基因失活（gene inactivation）： 反义核酸是指能与特定mRNA或者DNA互补、特异阻断其转录或翻译的RNA或DNA分子。反义核酸技术, 指将特定的反义核酸导入细胞，通过碱基互补作用与mRNA或DNA结合，阻断细胞中基因的异常表达。 包括：反义RNA;反义DNA；核酶（负性调节作用因子);decoy等 人工合成的短小反义寡聚核苷酸(antisense oligodeoxyncleotides，AON)，这是反义核酸最普遍的应用方式； 人工表达载体； 主要挑战 如何在足够多的特定的细胞里获得有效的基因转染，并保证一定的时效。这个挑战的难度由不同的疾病，疾病的位置，靶细胞的特点以及合适的基因载体决定。 基因转移的途径： 1. 直接体内法 （in vivo): 将外源性基因直接导入受者体内的组织器官或者细胞内 2. 离体法 （ex vivo)：即先分离和培养受体细胞，在体外将外源基因导入载体细胞，然后将基因转染后的细胞回输给受者 基因治疗的两种途径 1. 直接体内法 （in vivo)； 2. 离体法 （ex vivo) 病毒载体介导的基因转移方法 慢病毒载体介导法； 逆转录病毒载体； 腺病毒载体； 腺相关病毒载体; 单纯疱疹病毒(HSV)载体介导法 第三代慢病毒表达系统的安全特点 去除了3’ LTR (ΔU3)，使其不再有启动/增强活性，从而形成了所谓的“自灭活”（Self-inactivation，SIN） 只保留了三个结构基因（ gag, pol, and rev). HIV-1的包膜蛋白来源于疱疹性口炎病毒 编码结构和包装病毒基因组所需的其他成分的基因分散到4个质粒。这些质粒相互之间没有同源性，减少重组现象。 三个包装质粒都不包含LTRs或者包装序列，所以HIV-1结构基因不表达于靶细胞中，不能产生新的病毒复制 产生的病毒颗粒没有复制功能，只是携带基因，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 不同载体系统的特性比较 病毒介导的靶向基因转移 受体/配体或抗原/抗体介导的靶向基因转移 目的基因表达的靶向性 组织特异性调控元件调控基因转录(PSA,CEA,SP-A） 肿瘤特异性调控元件调控基因表达（hTERT, FLK-1,E2F, HRE) 治疗基因的受控表达 可诱导表达系统 （tet-on/off) 特异反应性诱导表达系统(电离辐射，缺氧） 调控序列对基因表达 （组织特异性启动子） 目的基因的长期表达 细胞介导的基因治疗 （cell based gene therapy) 干细胞 免疫细胞 内皮细胞 Science. 2003 Oct 17;302(5644):415-9. LMO2-associated clona