烟草提取物对小鼠肺的影响.docVIP

烟草提取物对HELF细胞中p53 基因 表达水平的影响及其意义 院系：生命科学院 作者：翁瑜阳 指导老师：卢大儒 教授 摘要：已有研究表明，香烟烟雾能够影响p53基因的稳定性并诱发肿瘤。为探索香烟烟雾是否还能影响p53基因的表达水平，开展了本课题。我们进行毒性实验。通过应用qPCR技术，分析p53基因的转录情况。实验结果表明香烟烟雾提取物会影响抑癌基因p53的转录，最终使其转录水平下调。提示烟草提取物可能通过减少P53的转录水平，从而诱导肿瘤的发生和发展。 关键词：HELF细胞 p53基因 转录 基因水平 The role of tobacco extraction in the transcription of p53 gene in HELF cells Abstract：Studies have demonstrated that cigarette smoke can affect the stability of p53 gene and cause human cancer，especially the lung cancer. To explore whether cigarette smoke can affect the expression of p53 gene, we conducted a toxicity experiment as well as used RT-PCR technique to analyze p53 gene transcription. The results show that cigarette smoke reduces the tumor suppressor gene p53 gene expression and may induce tumor occurrence and development through the reduction of the level of p53’s transcription. Keywords: HELF cell, p53 gene, transcription, gene level 引言 目前，中国已成为世界上香烟生产和消费的超级大国。政府正在拟订在公共场所禁止吸烟的政策。 吸烟以及香烟烟雾对健康产生的巨大危害已经日益引起广泛的关注。吸烟会导致肿瘤（cancer），尤其是肺癌（lung cancer）的发生。近年来，肺癌已成为世界上最高发病率的肿瘤。研究表明，有90%的肺癌病人是直接或者间接的由于吸烟而引起的【1】。除了肺癌，吸烟还会引起其他如气管癌，口腔癌，肝癌，咽喉癌，膀胱癌，肾癌等多种癌【2】。随着2010年举世瞩目的世博会的举办，提高我国国民对吸烟危害性的认识，有效的阻止人们在公共场所吸烟，对创造良好的世博会环境进一步提升我国的国家形象亦将十分重要。 p53是目前世界上被研究最为透彻的一种肿瘤抑制基因（tumor suppressor gene），它是一种基因调控蛋白【3】。当细胞接受到外界的不良刺激，p53被细胞应急产生，会结合到其下游基因的启动子（promoter）上，p53调控的下游基因主要有两类，一类是与细胞周期相关，让细胞停止细胞分裂，避免已经受到损伤的DNA复制新的DNA，把损伤的DNA传递给子代细胞扩大危害。在细胞周期停留期，细胞会进行DNA修复；P53的另一类调控下游基因的功能是细胞凋亡（apoptosis）【4】。当细胞所承受的损伤太大而无法修复时，p53启动一些蛋白质（酶）的表达把这些受损严重的DNA切割成小片段的DNA，细胞由此而进入程序性的死亡，又称凋亡【5】。由此可见p53是细胞内最重要的“警戒”蛋白。 当细胞内的p53基因本身受到损伤时，它的“警戒”功能不能正常运行，细胞内受损的DNA会一代又一代的延伸下去，细胞因此而变成异常，其生长调控消失，而演变成恶性生长的细胞【6】。据研究发现人类70%以上肿瘤都发现了p53基因的突变和p53蛋白质功能的异常【7】。已有的研究还表明，吸烟者的肺组织中常伴随P53基因的点突变和缺失，烟雾通过影响小鼠肺基因p53基因的稳定性诱发肿瘤【6】。 图1 在第17条染色体上P53基因表达 图2 P53蛋白示意图 本研究拟通过用香烟烟雾提取物处理HELF细胞，比较不同时间长度的毒性试验的烟草提取物处理的HELF细胞中p53基因的转录差异，从而试图揭示香烟烟雾对P53基因表达的影响。 材料与方法 1．1 毒性实验 （1）烟草提取物的制备。根据设计图1所示烟草提取装置，三通管一端连接注射器，一端通过橡皮软管与香烟相连，还有一端连接收集器。香烟（555牌）点燃后，利用三通管将烟雾吸至注射器中，再旋转三通管，将烟雾缓慢注入收集瓶中，收集瓶中加入100