肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药作用及其机制研究.pdf

肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 中文摘要 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用 及其机制研究 中文摘要 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages，TAM)在乳腺肿瘤 细胞耐药中的作用及其分子机制。 方法：1、PMA 、IL-4 、IL-13 刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1，运用流式细 胞术检测细胞表面分子CD14、CD204、CD206 的表达改变，建立TAM 细胞模型；2 、 采用MTT 法和Hoechst 染色法观察TAM 细胞与乳腺肿瘤细胞T47D、BT-549 直接接 触共培养、TAM 培养上清与肿瘤细胞共孵育体系中，TAM 细胞对乳腺癌细胞系药物 耐受性的影响，进而运用Western Blot 检测TAM 细胞对肿瘤细胞的STAT3、JNK 磷 酸化水平的影响，再用Real-Time PCR 方法检测TAM 细胞对肿瘤细胞bcl-2 基因表达 的影响；3、通过ELISA 法检测TAM 上清中IL-10 含量的改变，并采用Real-Time PCR 方法分析IL-10 对肿瘤细胞抗凋亡基因bcl-2 的调控作用，运用Western Blot 检测TAM 细胞对肿瘤细胞的STAT3 信号通路的调控情况。 结果：1、经PMA 、IL-4 、IL-13 刺激后THP-1 细胞表面CD14、CD204、CD206 的表达水平增加，提示成功建立TAM 细胞模型。2 、TAM 细胞或TAM 培养上清与 肿瘤细胞共培养均可显著削弱紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤，明显下调其bcl-2 基因表达 水平以及凋亡信号JNK 的磷酸化水平(p 0.05)，同时显著上调STAT3 的磷酸化水平 (p 0.05) 。3、TAM 细胞表达高水平IL-10，细胞毒性分析显示IL- 10 可显著提高肿瘤 细胞耐药能力，同时上调肿瘤细胞抗凋亡基因bcl-2 、抗凋亡蛋白p-STAT3 的表达； 若封闭TAM 培养上清中的IL-10，肿瘤细胞的药物敏感性显著提高，且bcl-2 表达水 平下降，提示IL-10/bcl-2 信号通路的激活可能是TAM 细胞诱导耐药的机制之一。 结论：本研究发现了 TAM 细胞在诱导乳腺癌耐药中的重要作用，探讨了 IL-10 介导的bcl-2 信号通路在 TAM 细胞诱导乳腺癌耐药作用中的关键作用，初步揭示了 TAM 细胞诱导耐药的分子机制，为抗肿瘤治疗提供了实验基础。 I 中文摘要 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 关键词：肿瘤相关巨噬细胞；乳腺癌；耐药；白细胞介素-10 作 者：何林燕 指导教师：高 锋 II 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 英文摘要 The Effect of Tumor-associated Macrophages on Chemotherapeutic Resistance of Human Breast Cancer and the Mechanism involved Abstract Objective：In order to observe the effect of tumor-associated macrophages (TAM) on drug resistance and further to explore the role of T