Nestin及CD133在大鼠脑室出血模型中的表达及意义.pdf

中文摘要 Nestin及CDl33在大鼠脑室出血模型中的表达及意义 摘 要 目的： 自发性脑室内出血是由于非外伤性因素所致的颅内血管破裂，血液进 入脑室系统所出现的临床常见急症，其发病率占自发性颅内出血的20％ 轻重不一，脑积水及脑血管痉挛是最常见的并发症。目前，关于自发性脑 室内出血的研究多集中于出血后继发性脑积水的成因方面，而针对出血后 神经组织损伤机制的研究尚不多见，此损伤过程的病理生理机制仍不清 楚。为此，本实验研究通过建立大鼠脑室出血模型，重点观察了脑室出血 Nestin和CDl33在脑室出血后神经组织损伤过程中可能发挥的作用机制。 方法： (n=25)，生理盐水对照组(n=25)，空白对照组(n=5)。 非抗凝自体尾动脉血分次注入到侧脑室建立侧脑室注血组，生理盐水对照 组则将等量生理盐水注入到侧脑室中，空白对照组除不进行脑室注射处理 外，余操作同其他两组，所有大鼠在同一环境下喂养。 3．设立术后1、2、3、7、14天五个时间点将实验组与对照组大鼠进行神 经行为学评分并称重后处死断头取脑，将标本置于4％多聚甲醛PBS液中 固定24h，自前囟后0．40mm冠状切开脑组织，观察并测量侧脑室宽度(冠 状面的侧脑室宽度≥1．0mm为脑积水)，随后进行石蜡包埋，做59m厚连 续切片，行HE染色观察比较侧脑室注血组、生理盐水对照组、空白对照 组脑组织病理变化并做免疫组化染色，高倍镜下分别计数不同时间点实验 组和对照组Nestin及CDl33阳性细胞的个数； 中文摘要 1 4．统计学分析：使用SPSS5．0统计软件对实验数据进行统计学分析。组 间计量资料比较采用t检验，以P0．05表示差异有统计学意义。 结果： 1．一般观察：各个时间点脑室注血组大鼠体重下降分别为5．75+1．509、 10．75+2．999、21．25+6．299、45．00+5．779、71．25+2．509，生理盐水对照组 术后2、3天脑室注血组与生理盐水对照组有统计学意义(尸O．05)。术后7 分别为13．0-a：1．0、17．6+0．5、18．0+0．7、18．6+0．5、18．8士0．4，空白对照组 大鼠评分无异常。经统计学检验，注血1天及14天与生理盐水对照组相比 有统计学意义(户O．05)； 2．脑室扩张：脑室注血组1天及3天、7天及14天四个时间点侧脑室宽度分 水对照组在l天及3天、7天及14天四个时间点侧脑室宽度分别为 个时间点无明显变化。 3．免疫组织化学染色：脑室注血后1、2、3、7、14天五个时间点室管膜 下区的Nestin阳性表达细胞数量占总细胞数量的比例分别为：24． 理盐水对照组各个时间点室管膜下区的Nestin阳性表达细胞数量占总细 胞数量的比例分别为：7．334-2．66％、7．79+1．52％、8．09+2．18％、8．62-+7．50％、 阳性表达细胞数量占总细胞数量的比例分别为：11．49-+3．78％、 个时间点室管膜下区的CDl33阳性表达细胞数量占总细胞数量的比例分 后各时间点，脑室注血组和生理盐水对照组阳性细胞比例有统计学差异 2 中文摘要 (P0．05)。 4．免疫荧光检测Nestin阳性细胞：将石蜡切片行免疫荧光染色，于荧光显 性细胞数量在各个时间点均多于生理盐水对照组；同一脑组织标本中注血 侧与对侧室管膜下区荧光表达量在3天时有明显区别，而在其他时间点未 见明显差异。 结论： 1．本实验采用尾动脉分次注血法制备大鼠脑室出血模型，模型稳定，使 用非抗凝自体动脉血更加符合自然发病过程，故能够较好地模拟临床脑室 出血后的变化。 急剧增高，2天时Nestin表达略有下降，3天时表达又有所升高，7天时表 达进一步增高，14天时表达较前升高但低于l天时水平，Nestin表达在生 理盐水对照组轻度增高。 3．CDl33的表达亦具有时间相关性，在脑室注血l天达到高峰，2天时表 达下降，随后3天时表达增高，7天时表达较3天时小幅度增高，14天表达 水平较7天时升高，对照组表达平稳。 4．注血1天时右侧脑室明显扩张，3天时见双侧脑室扩张，7天时双侧脑室 扩张较3天时明显，14天时脑室较之