蛇足石杉内生真菌分离及生物活性初步的研究.pdf

蛇足石杉内生真菌的分离及生物活性初步研究 摘 要 本文以药用植物蛇足石杉(Huperzia serrata (Thunb.) Trev)为材料，进 行内生真菌的分离以及活性菌株的筛选，对其中活性较强菌株进行进一 步研究，结果如下： 1．采用组织块分离法，从蛇足石杉根、茎、叶中共分离出内生真菌 180 株，初步鉴定为2 亚门、4 纲、7 目、8 科、13 个属，其中茎点霉属 (Phoma sp.) 、组丝核菌属(Phacodium sp.) 为优势种群，分别占总菌株数 的 18.61%和 16.15% 。内生真菌在蛇足石杉的不同部位的数量、分布和 种群上存在有差异，茎中最多，其次为叶片，根中最少。从分离时间来 看，4-5 天和11-13 天分离出的内生真菌株数量较多。 2．选择具有代表性的菌株68 株，以纤溶活性、抗细菌、抗植物病 原真菌、抗肿瘤细胞、以及代谢产物的HPLC 检测五个模型进行活性菌 株的实验，从中筛选到部分具有不同活性的菌株。 3．结合各筛选模型，选取一株活性最好的菌株HU046 进行ITS 序列 测定比对，将菌株HU046 初步鉴定为茎点霉 (Phoma sp.) 。 4．通过对蛇足石杉内生真菌 HU046 的各种单一因子的培养生物学 特性研究发现：其最适生长温度为26 ℃；最适pH 4.0 ；适合在黑暗条件 下生长；最佳碳源为玉米粉；最佳氮源为酵母浸膏；最佳C/N 30:1。 5．运用气相色谱-质谱联用法对菌株HU046 的发酵液挥发性成分进 行研究，共检出11 种成分，主要为烷类，酮类，酚类和酯类化合物。 6．采取大孔树脂、硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层层析等手段对菌 株HU046 的代谢产物进行分离纯化，共得到3 种化合物，以1H NMR 、 13C NMR 等波谱手段鉴定出其中的一种为甘露醇。 7．TLC 、HPLC 分析结果表明，菌株HU046 的次生代谢产物中可能 含有石杉碱甲或其类似物。 关键词：蛇足石杉；内生真菌；生物活性；代谢产物 The Isolation and Bioactivity of Endophytic Fungi in Huperzia serrata (Thunb.)Trev. Abstract A medicinal plant Huperzia serrata (Thunb.)Trev. has been selected to isolate its endophytic fungus, screened the bioactive strains and studied the strain with better bioactivities. The results were as follows: 1. There were 180 strains of endophytic fungus isolated and purified from the roots, stems and leaves of Huperzia serrata by the technique of tissue isolation. They were identified as 2 subdivsions, 4 classes, 7 orders, 8 families, and 13 genus. Phoma sp., Phacodium sp. were dominate genus in Huperzia serrata, their percent were 18.61% and 16. 15% of the all strains. It showed that the quantities, species and distribution of endophytis fungus varied with different parts of Huperzia serrata. The most of them were in stems and the least were