机械刺激后大鼠牙髓HSP70表达的动态变化.pdfVIP

中文摘要 前 言 shock 、热休克反应(heat response)是细胞遭受特殊环境刺激 shock 时进行自我保护的防御机制，以热休克蛋白(heat protein)表 达增加为特点。热休克蛋白70是热休克蛋白家族中重要的组成 成分，其某些成员持续表达而另一些成员只有在细胞受到刺激后 才有所表达，持续表达的是构成性HSP70，在细胞的各种生理活动 中发挥重要作用；受到刺激后才表达的为诱导性HSP70，由于它与 细胞受到的各种刺激密切相关，其表达量与细胞的获得性耐温性 (acquired 研究的热点。获得性耐温性是指预先给细胞一种低于致死量的热 休克处理，该细胞会对继之给予的致死量的热休克处理具有耐受 性。细胞的这种一过性的对刺激的耐受性对保护细胞和组织功能 极为重要，而由于HSP70表达水平与细胞耐温性存在着量上的伴 行关系，因此研究机械刺激后HSP70表达水平的动态变化就可以 间接了解预刺激后细胞获得性耐温性的动态改变，从而为进一步 利用获得性耐温性保护细胞和组织提供理论依据。本实验的目的 即为研究口腔最常见的机械刺激是否引起牙髓内HSPT0表达的 变化及其表达量与时间的关系。 ， ， 材料和方法 领取实验动物(体重280—300克的雄性SD大鼠20只)并进 行实验动物分组，将实验对象分为5组：正常对照组，刺激后即刻 观察组，刺激后4小时观察组，刺激后8小时观察组，刺激后24小 ·1· 时观察组各4只大鼠。将对照组及实验组大鼠均用0．4％戊巴比 妥钠按1毫升／100克体重剂量进行腹腔麻醉，对照组大鼠麻醉后 即处死，实验组大鼠麻醉后固定，用307—6台钻(上海齿科医疗器 械厂，转速3000转／分钟)在其左右上颌第一磨牙猞面正中进行机 械刺激(刺激时间控制在1．5min左右)，分别于刺激后即刻，刺激 后4小时、8小时、24小时各处死4只大鼠。大鼠处死后立即取左 右上颌第一磨牙及附近部分牙槽骨组织，生理盐水冲洗，置4％多 聚甲醛固定液内并作好标记，4℃冰箱内固定24小时，将标本取出 置于8mol／L甲酸一lmoL／L甲酸钠复合脱钙液内，4℃脱钙20天， 每天更换脱钙液并修剪组织块。脱钙完成后将组织块进行酒精梯 度脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，切片机制备冠根纵向石蜡切 片，片厚5斗m。进行HE染色及HsP70免疫组织化学染色(兔抗 HsP70多克隆抗体，SP法)。空白对照实验以PBS替代I抗，其余 Me洲orph分析软件(UIC，US)对免疫组化染色标本进行图象分 析。 实验结果 免疫组织化学染色结果表明，HsP70在正常未受到刺激的牙 髓内及刺激后不同时间的牙髓内均有表达，HSP70普遍存在于牙 髓中各种细胞内，成牙本质细胞及胞浆突起、牙髓成纤维细胞、血 管内皮细胞及管壁平滑肌细胞、神经节细胞内均有表达，其中又以 成牙本质细胞及胞浆突起内表达更为明显。牙髓受到机械刺激后 即刻观察组HSIy70表达量及表达强度与正常牙髓无明显差异。 刺激后4小时取材组，HSP70表达量明显增加，与正常牙髓相比差 高峰，成牙本质细胞出现强阳性的着色，与正常牙髓之间差异明显 ·2· 组及8小时组明显减少，差异显著(P0．05)，而与正常牙髓之 间则无明显差异(P0．05)。空白对照无阳性着色。免疫组化 染色标本各组图象的积分光密度值(IOD)方差分析结果表明，牙 髓受到机械刺激后0小时HSP70表达与正常组无差异，其后随着 时间延长HSP-／0表达有所增加，至8小时达高峰，其后表达逐渐 减少，刺激后24小时HSP70表达量基本恢复至刺激前水平。 讨 论 免疫组织化学染色结果表明，在正常未受到刺激的牙髓， HSP70普遍存在于牙髓各种细胞内，其中成牙本质细胞及胞浆突 起内表达更为明显。牙髓内各种细胞都不断进行着生理活动，因 此都表现出HSP70阳性着色。成牙本质细胞是牙髓内唯一能形 成牙本质的细胞，牙齿发育完成后仍然不断地分泌