1.2基因工程的基本操作程序38866.pptVIP

3.2.1、将目的基因导入动物细胞的方法： ①方法：显微注射法 ②程序： 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 4、目的基因的检测与鉴定 4.1检测— 4.2鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原—抗体杂交 4.1.1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: * 什么叫基因？ 基因－－有遗传效应的DNA片段。 什么叫遗传效应？ 遗传效应－－ 能转录为mRNA，继而翻译为蛋白质； 能转录为核糖体RNA； 能转录为转运RNA。 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1、目的基因的获取 1.1、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 1.2、获取目的基因的常用方法有哪些? 1.2.1、从基因文库中获取 1.2.2、利用PCR技术扩增 1.2.3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 1.2.1、从基因文库中获取 1.2.1.1.基因文库 1.2.1.2.如何从基因文库中获得目的基因 基因文库 基因组文库 cDNA文库 基因文库的构建方法 1.2.1.1.基因文库 ①基因组文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体 连接导入 某生物体内全部DNA 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体 连接导入 ②部分基因文库（cDNA文库）构建 通过对受体菌的培养而储存基因 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 1.2.1.2.如何从基因文库中获得目的基因 1.2.2、利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________________、 ____________________、 ___________ 、 ___________.等 ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 dNTP(dCTP dATP dGTP dTTP) 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件） ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 逆转录法 目的基因的信使RNA 目的基因 化学合成法 肽链氨基酸序列 信使RNA序列 基因的核苷酸序列 目的基因 合成 逆转录 人工合成法 推测 推测 单链DNA 合成 1.2.3、人工合成 基因较小，核苷酸序列已知，可以利用DNA合成仪人工合成 2、基因表达载体的构建——基因工程的核心 2.1、基因表达 2.2、基因表达载体 2.1.1、基因的结构 2.1.2、基因表达 2.2.1、基因表达载体构建目的 2.2.3、基因表达载体构建过程 2.2.2、基因表达载体组成 ①、原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶（蛋白质）识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质