棉花精氨酸脱羧酶基因GhADC1克隆与表达分析.pdfVIP

棉 花 学 报 CoRonScience 2013，25(4)：291-299 棉花精氨酸脱羧酶基因GhADC1克隆与表达分析 李亚栋 ，默辉娟 ，王省芬 ，孙艳香 ，马峙英 (1．河北农业大学 ／河北省作物种质资源重点实验室，河北 保定 071001； 2．廊坊师范学院遗传与育种研究所，河北 廊坊 065000) 摘要 ：以抑制性消减杂交(SSH)文库序列为基础，采用生物信息学和 RT．PCR方法从陆地棉 中克隆出精氨酸 脱羧酶基 因，命名为 GhADC1，GenBank登录号为 KC851856。该基 因全长 2954bp，其 中5’非翻译区477bp， 具有多个参与胁迫响应的顺式作用元件和一个编码 8个氧基酸 的微型编码序列 (uORF)；主编码 区(mORF) 2181bD，共编码 726个氨基酸 ，其 中N端具有叶绿体定位信号肽。推测 的GhADC1蛋 白具有 PLP结合位点及 Om／Dap／Arg脱羧酶的信号位点，属于典型的III型PLP依赖型精氨酸脱羧酶家族成员。荧光定量RT．PCR结 果表 明，正常条件下，GhADC1在叶片中表达量高于茎和根部组织，且在抗黄萎病 品种冀棉 20中的表达水平 高于耐病 品种 中521；黄萎病菌胁迫能够快速诱导抗病 品种根部 GhADC1表达 ，而在耐病 品种 中未见 明显差 异 ，推测在抗病 品种 中GbADC1可能参与根部对黄萎病菌胁迫 的早期应答。 关键词 ：棉花 ；精氨酸脱羧酶基 因；多胺 ；黄萎病菌 ；基 因表达 中图分类号 ：$562．035．3 文献标 志码 ：A 文章编号 ：1002．7807(2013)04—0291—09 CloningandExpressionAnalysisofanArginineDecarboxylaseGenefrOm Gossypium hirsutum LIYa—dong，MOHui-juan，WANGXing—fen，SUNYan—xiang，，MAZhi-ying (1．AgriculturalUniversityofHebei,KeyLaboratoryofCropGermplasmResourcesofHebei,Baoding071001，China；2．Insti— tuteofGeneticsandBreeding,LangngNormalUniversiyt,Langfang065000，Chn／a) Abstract：Basedonasequenceinasuppressionsubtractivehybridizationlibrary，GhADC1，GenBankaccessionno．KC851856， anargininedecarboxylasegenewasclonedfrom uplandcoRonusingbioinformaticsandRT-PCRtechnologies．Thefull—length eDNA ofGhADC1was2954一bplong．The5’UTR was477一bpandcontainedseveralc妇-actingelementsinvolvedinstressre— sponsesandauORFencodingan8-aminoacidsequence．ThemainORFwas2181-bplong，andencoded726aminoacidswith aputativeN—terminalchloroplast—targetingsignalpeptide．ConserveddomainanalysisshowedthatGhADC1confinedaPLP bindingsiteandanOrn／Dap／Argdecarboxylasesignalsite．ThesecharacteristicsindicatedthatitbelongstothetypeIIIPLP—de- pendentargininedecarboxylaseproteinfamily．Quantitativereversetranscription—polymerasechainreactionresultsshowedthat， underuntreatedconditions，theexpressionlevelofGh