产GABA乳酸菌菌株选育及最佳发酵条件的研究.docVIP

产 GABA 的乳酸菌菌株的选育及最佳发酵条件研究 摘要 γ-氨基丁酸（简称 GABA），又称氨酪酸，是一种天然存在的非蛋白质氨基酸。 本文主要对 GABA 高产乳酸菌进行选育，优化其发酵条件。 经 UV 诱变、NTG 诱变和 UV、NTG 复合诱变，得到 1 株高产 GABA 的突变株F11。 经高效液相色谱测定，在最佳诱变条件下诱变的菌株 GABA 产量达到 0.87 mmol/L，是出发菌株产量（0.21mmol/L）的 4 倍多。 对 F11 的培养基和发酵条件进行优化，GABA 最大产量 1.19 mmol/L，是出发菌株 HDBR-02产量的近 6 倍。 通过诱变方法获得的 GABA 高产乳酸菌菌株，扩大了 GABA 产生菌来源，为 GABA 的生产奠定了良好的基础。 关键词 γ-氨基丁酸； 乳酸菌； 诱变； 发酵 GABA 是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑 制性神经递质，参与脑循环生理活动，具有降压， 改善脑机能，增强记忆，抗焦虑等生理功能，是医 药、 食品中的一种重要的功能因子。 自然界中 GABA 分布非常广泛，在动物、植物和微生物中均 存在， 但动物和植物中的 GABA 含量低， 不易提 取。 微生物是目前 GABA 的主要来源。 早期研究以大肠杆菌发酵法生产 GABA 为 主。 该法利用大肠杆菌的谷氨酸脱羧酶的脱羧作 用，将 L-谷氨酸转化为 GABA，然后分离纯化得到 GABA。 对于食品工业而言，以大肠杆菌作为生产 菌株存在极大安全隐患。 人们发现，曲霉体内含有 的谷氨酸脱羧酶可以用于生产 GABA [1] ， 实践证 明， 除了少数种会产生桔霉素外， 多数都比较安 全。 酿酒酵母在发酵食品中获得了广泛使用，具有 很高的安全性 [2] ，也具有较高的 GAD 活性。 目前， 人们又发现一些乳酸菌 [2] 也表现出 GAD 活力。 日 本在应用乳酸菌生物合成 GABA 方面研究最早 [2] ， 在植物乳杆菌 （Lactobacillus brevis） IFO-12005 对酒糟的发酵过程中，GABA 含量达到 0.18 mmol/ L，通过离心、絮凝、脱色和脱臭处理，获得较好的 GABA 溶液 [3] 。 以本课题组保藏的 GABA 产生菌为出发菌 株，通过诱变和优化发酵条件，从代谢途径上解除 次级代谢产物的抑制作用， 从而获得高产 GABA 的产生菌。 扩大了产 GABA 的菌种来源，为工业上 生产应用及作为食品、 药品的添加剂提供理论依 据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株及保藏条件 HDBR-01： 植物乳杆菌 （Lactobacillus plantarum）；HDBR -02： 短 乳 杆 菌 （Lactobacillus brevis）；HDBR -03： 植 物 乳 杆 菌 （Lactobacillus plantarum）；HDBR-04：植物乳杆菌 （Lactobacillus plantarum）；HDBR-05：副干酪乳杆 菌（Lactobacillus paracasei）；HDBR-06：乳酸乳球 菌（Lactococcus lactis）。 以上菌株由黑龙江大学微 生物重点实验室提供，在 MRS 琼脂斜面保藏培养 基上传代，4 ℃保存，每两周转接一次。 收稿日期： 2012-09-05 基金项目： 国家自然科学基金 ； 黑龙江省教育厅重点项目（11551z011）；黑龙 江省科技攻关重大项目（GB05B401）；哈尔滨 市科技创新人才研究专项资金项目优秀学科 带头人（RC2010XK002028）；黑龙江省科技厅 “农业微生物发酵技术”科技创新团队 作者简介： 葛菁萍，女，1972 年出生，博士 通讯作者： 平文祥 Vol． 13 No． 9 Journal of Chinese Institute of Food Science and TechnologySep． 2 0 1 3 中 国 食 品 学 报 第 13 卷 第 9 期 2 0 1 3 年 9 月第 13 卷 第 9 期 1.1.2 培养基及相关试剂产品 MRS 培养基 （g/ L）：蛋白胨 10，牛肉膏 10，酵母膏 5，葡萄糖 20， 乙酸钠 5， 柠檬酸三铵 1.44，K 2 HPO 4 2，MgSO 4 · 7H 2 O 0.58，MnSO 4 ·4H 2 O 0.25，吐温-80 1 mL （ 固 体培养基中加 2%琼脂）， 调 pH 值至 6.6～6.8，121 ℃高压湿热灭菌 15 min，用以保藏菌种和传代。 GYP 种子培养基（g/L）：葡萄糖 10，酵母提取 物 7.5，蛋 白 胨 5，无 水 乙 酸 钠 2，MgSO 4 ·7H 2