第10章 原核生物基因表达调控.docVIP

第10章 原核生物基因表达的调控 10.1 原核生物基因调控序列 调控序列是调节基因表达的序列，位于基因的侧翼（flanking region），可对一些特定分子起反应。调控序列并不表达，它所包含的信息是为信号分子提供识别序列并与信号分子相互作用，从而调节附近的结构基因的转录。常见的调控序列有5类： 启动子（promoter，P）：启动子是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。常位于结构基因的上游，长度20～200bp。原核生物启动子含有两段共同的保守序列，一个是位于-10区的保守序列TATAAT，由D.Pribnow(1975)发现，故称Pribnow box；另一个是-35区的保守序列TTGACA。-10区的保守序列是σ因子的结合区，-35区的保守序列是RNA聚合酶的另一个结合区。启动子也可以结合其他调节蛋白而调控转录。 操纵子（operator，O）：操纵子位于结构基因和启动子之间，是与阻遏蛋白质结合的一段DNA序列。阻遏蛋白质与操纵子有很强的亲合力，可以阻止RNA聚合酶到达转录起始点。 衰减子（attenuator）：衰减子位于前导序列的P-O区与第一个结构基因起始点之间，长度为162bp，它可以微调转录活性，其效果约为10倍。衰减作用并不依赖于阻遏作用，它是由于结构基因转录前体的终止而产生。 增强子（enhancer）：增强子是通过增加对所调节基因进行转录的RNA聚合酶的分子数量而提高转录效率的顺式作用因子，它并无特定的位置，在不同的基因中位置是可变的，可以位于基因上下游。增强子可以被序列特异性结合蛋白激活，主要在组织特异性基因表达和发育过程中的基因时序表达中起调节作用。 终止子（terminator）：终止子是为RNA聚合酶转录提供终止信号的一段DNA序列。终止子按其作用是否需要蛋白质因子的协助可分成2类：不依赖ρ因子的终止子和依赖于ρ因子的终止子。 10.2操纵元的概念及一般结构 10.2.1操纵元概念的提出 细菌能随环境的变化，迅速改变某些基因表达的状态，这就是很好的基因表达调控的实验模型。人们就是从研究这种现象开始，打开认识基因表达调控分子机理的窗口的。 大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖，当培养基中含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间所以适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。 　　大肠杆菌利用乳糖至少需要需要两个酶：促使乳糖进入细菌的乳糖透过酶(lactose permease)和催化乳糖分解第一步的? －半乳糖苷酶(? -galactosidase)。 　　在环境中没有乳糖或其他? -半乳糖苷时，大肠杆菌合成? -半乳糖苷酶量极少，加入乳糖2～3分钟后，细菌大量合成? -半乳糖苷酶，其量可提高千倍以上，在以乳糖作为唯一碳源时，菌体内的? -半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的3%。在上述二阶段生长细菌利用乳糖再次繁殖前，也能测出细菌中? -半乳糖苷酶活性显著增高的过程。这种典型的诱导现象，是研究基因表达调控极好的模型。 针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象，法国的Jocob和Monod等人做了一系列遗传学和生化学研究实验，于1961年提出乳糖操纵元（lac operon）学说。 操纵元（operon）是指代谢上相关的一些基因聚合在一起组成一个受共同调控序列控制的转录单元。一个操纵元内的基因在代谢途径上一般都是关联的，其表达也协同地被调节，作为一个转录单位，这样也便于原核生物对外界环境迅速地做出反应。 10.2.2操纵元(operon)的基本组成 乳糖操纵元模型被尔后的许多研究实验所证实，对其有了更深入的认识，并且发现其他原核生物基因调控也有类似的操纵元组织，操纵元是原核基因表达调控的一种重要的组织形式，大肠杆菌的基因多数以操纵元的形式组成基因表达调控的单元。下面就以半乳糖操纵元为例子说明操纵元的最基本的组成元件（elements）。 (1)结构基因群 操纵元中被调控的编码蛋白质的基因可称为结构基因(structural gene, SG)。一个操纵元中含有2个以上的结构基因，多的可达十几个。每个结构基因是一个连续的开放读框(open reading frame), 5′端有翻译起始码，3′端有翻译终止码。各结构基因头尾衔接、串连排列，组成结构基因群。至少在第一个结构基因5′侧具有核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS)，因而当这段含多个结构基因的DNA被转录成多顺反子mRNA，就能被核糖体所识别结合、并起始翻译。核糖体沿mRNA移动，在合成完第一个编码的多肽后，核糖体可以不脱离mRNA而继续翻译合成下一个基因编码的多肽，直至合成完这条多顺反子mRNA所编码的全部多肽。 乳糖操纵元含