脂肪嗜热芽孢杆菌质粒pFD101的限制性内切酶图谱.pdfVIP

遗 传 学 报， 10(5):347351,1983 Acta一CeneticaSinica 脂肪嗜热芽抱杆菌质粒pFD101的 限制一性内切酶图谱 张君凯江行娟王顺德汪训明沈仁权 （复旦大学遗传学研究所，上海） 从脂肪嗜热芽抱杆茵T525中抽提得到的隐蔽性质粒pFD101，经纯化后通过琼脂塘凝胶 电泳和电镜观察，确证为 。ccDNA。经侧定，pFD101的分子量为3.83x10`道尔顿。具有限 $11酶HindIll切点1个、Sall和H：pill切点各2个，没有EcoRI.BamHI和Pstl切点。根据限 制酶片段的分子量作出了pFD101的简单酶切图。 从高温细菌中分离得到4株含有质粒的脂肪嗜热芽抱杆菌 江（行娟等 “高温细菌质粒 调查”，微生物学报，待发表，）我们对其中1株 T525所含的质粒 pFD101进行了限制性 内切酶酶解分析，为进一步研究常温细菌和高温细菌的杂种质粒提供资料。 方 法 和 材 料 养培基成份、培养方法、质粒抽提与纯化，以及电泳和电镜所用方法参见江行娟等“高 温细菌质粒调查”一文 微（生物学报，待发表）。 限制性内切酶：HpaII为美国NewEngland公司产品；HindIII,Sall,EcoRI, BamHI,PstI为美国Miles公司产品。 限制性内切酶反应液：HindlIl按美国Miles公司产品说明书所载，略去 BSA(6mM Tris,PH7.5,50mMNaCl;6mMMgClz配成10X母液备用）。其他酶反应液均按 Bingham 等I“的方法。双酶解时则一律使用 HindIII的反应液。 DNaseI对质粒 DNA作局部酶解时按 Roth等3，〔的方法。 结 果 一（）从两个实验结果可以说明从T525中抽提得到的2条质粒带是属．于同一种质粒 的两种构型：(1)图3中的第3条未经HindIII酶切时可见2条质粒带厂，·经 HindIII酶 切后，图3中第5条原来两带消失，只见介于两带之间的一条，这是由于两种不同构型的 同一种质粒都被酶解成为线型分子；C2）用 DNase作不完全酶解后，迁移快的一条量减 少 （图1的b2比b,淡），原来迁移率较慢的位置上 （图1第2条as）的量大为增加，由于 DNase的作用可以使 ccc分子转变为oc分子。可见原来迁移慢的一条便是同一质 粒的oc型。 本文于 1982年7月22日收到。 348 遗 传 学 报 10卷 二（）经电泳割胶纯化4【]的pFD101DATA作电镜观察，可见开环和共价闭合的超螺 1 2 旋的两种构型的质粒分子 （图2)。共测”个开 环分子周长，呈正态分布。周长平均值为1.85M (a,-,二0.155)。按 10～2.07X106d计算， pFD101的分子量为 3.83X106do 三（）用6种限制性内切酶分别对质粒 pFD1:01进行酶解后电泳，从电泳谱上出现的 条带数，可以推断HindIll对pFD101有1个 切点图（3第5条）；HpaII对pFD101有2个 切点 （图3第8条）；SalI对 pFD101有2个 切点，但相距甚近，因此小片段分子量甚小，图