一种改进的两栖类胚胎染色体制备方法.pdfVIP

4．快速离心3分钟，弃上清，真空千燥，溶 参 考 文 献 于水中。 ［I] Birnboim,H.C.:1983.MethodsEnzymol,100，243-- 酶切和顺序分析结果从略。以上实验步骤 255. 可看出，此法简便，快速、适合小量提取质粒 Eckhardt.T.:1987.Plasmid,I：584-588. Gibson,T.J.,andJ.E,Sulston:1987.GeneAnal. [[23]1 DNA。噬菌体 DNA(M13mp9）的制备用YT Techn,4:41-44. 液体培养基过液，取 1.6m1培养液离心，加 100 ［4］ Holmes,D.S,andM.,Quigley:1981.Anal.Biochem.., 114: 193- 197. 9 u1的 STET。方法同上。终 DNA 溶20z11水 Ortlepp,S.A.:1989.GeneAnal.Techn,g:93-96. Wohlhieter,J.A.etal.:1966.Biochim.Biopkys.Acta, 中，一次用10Plo ：｛｝ 129:475- 481. 一种改进的两栖类胚胎染色体制备方法’‘ 麦 明 （中国水产科学研究院黄海水产研究所，青岛，266003) 本文提供了一种改进的两栖类胚胎染色体制备方法。和原来的方法比较有三方面改进：分散细胞 采用了Versen。液，第二次固定采用了甲醇：冰乙酸(1:3）的固定液以及Ba(OH)：的后处理。结果表 明，染色体形态比原方法好，而且在多疵狭口蛙第7号染色体上观察到胚胎时期才存在的次猛痕。 关键词：两栖类，胚胎，染色体 两栖类是研究胚胎发育的好材料，通过对 轻吸打成细胞悬液。 离心800转／分，5分钟， 呸胎染色体的研究可以从染色体水平上进一步 去上清液。加生理盐水：蒸馏水 （1:3）的低渗 认识发育的本质。对于两栖类胚胎染色体的研 液室温低渗 10分钟。离心，除去低渗液加 甲 究国外有过几篇报道13,41。许多都是采用的压 醇：冰乙醋酸 3（:1)固定，分钟。第二次改用 片法。这种方法对进一步深人研究染色体 如（ 冰乙酸：甲醇 (3:1)固定5分钟。以后再用正 分带）影响很大。 1985年国内学者21〔采用低渗 常固定液 （3:1的甲醇：冰乙酸）固定两次。在 一空气千燥法制备出了两栖类胚胎染色体。由 冰箱中 （0-40C）过夜，次日滴片。制备好的标 于两栖类中一些种如我们选用的多优狭口蛙其 本放于，外Ba(OH)2溶液中室温处理 10分 胚胎卵黄对染色体形态干扰特别大，用上述方 钟，自来水冲洗，空气干燥。10外Giemsa染色 法不能制备出较满意的染色体标本。为此，我 10分钟 p（H=6.98) 们对这种方法加以改进。现将结果报道如下。 结 果 与 讨 论 材 料 与 方 法 以这种改进方法19*的染色体基本上排除 胚胎采集时间：7-9月份雨后。地点：云 了卵黄对染色体形态的干扰。在多沈狭 口蛙 南大学校园水塘。在解剖镜下观察胚胎发育到 MaiM:ng:A ImprovedMethodfortheEmbryo 原肠期时，除去胶膜