甘蓝型油菜透明种皮1基因家族克隆、表达调控及与黄籽性状关系.pdfVIP

甘蓝型油菜透明种皮1 基因家族的克隆、表达调控及 与黄籽性状的关系1 1, 1, 2, 1 1 2 1 1 柴友荣 ，路小春 ，李加纳 ，唐章林 ，李本逊 ，许本波 ，武声栋 1 西南大学农学与生物科技学院，农业部生物技术与作物品质改良重点实验室，重庆市油菜 工程技术研究中心，重庆 (400716) 2 云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 (650201) E-mail ：chaiyourong1@163.com 摘 要：拟南芥透明种皮1 （AtTT1 ）基因编码WIP 类型C H 锌指蛋白，是内种皮发育和种 2 2 皮色素积累的正调控因子。研究 TT1 基因，有利于揭示芸薹属植物种皮发育、类黄酮-原花 青素代谢和黄籽性状形成的机理。本研究采用 RACE 技术，克隆了甘蓝型油菜典型黑籽系 5B 中TT1（BnTT1 ）基因家族2 个成员的全长cDNA 和对应的基因组序列，它们间具有91.5% 的核酸序列一致性和95.0%的氨基酸序列一致性。NCBI BLAST 分析、序列两两比对、系统 发生学分析、特征结构域/基序预测等结果均表明它们是 AtTT1 的垂直同源基因，具有相似 的结构特征。它们均转录产生多种不同长度的成熟 mRNA ，均具有可变性转录起始位点和 poly(A)加尾位点，导致5’ UTR 和3’ UTR 的长度多态性，且最靠5’的可变性转录起始位点 还导致起始密码子前移和编码蛋白的N-末端比“标准”蛋白多 13 个氨基酸。Southern 杂交检 测表明，BnTT1 家族约有3 个基因成员。半定量RT-PCR 检测表明，BnTT1-1 和BnTT1-2 的 表达特征与AtTT1 相似，只在花和发育中的种子中表达，并推测它们象AtTT1 一样也是种皮 特异表达的。甘蓝型油菜近等基因黑籽系L1 和黄籽系L2 中的BnTT1-1 和BnTT1-2 序列与 5B 中一样，L1 中这2 个基因表达正常，L2 的花中这2 个基因表达也正常，但其种子中检 测不到它们的表达。该研究揭示了 BnTT1 基因在甘蓝型油菜籽色性状形成中的重要作用， 并推断L2 的黄籽性状的形成可能是由一个种皮特异性调控BnTT1 表达的上游调控基因的变 异而引起，为克隆BnTT1 的种皮特异启动子和BnTT1 上游源头的黄籽基因奠定了基础。 关键词：甘蓝型油菜；C H 锌指蛋白；种皮色素；透明种皮1(TT1)；黄籽性状 2 2 中图分类号：Q343.1+5 1. 引言 油菜是我国和世界性的重要油料作物，为食用油、动物饲料、加工工业及生物能源提供 重要原料。甘蓝型油菜（Brassica napus L. ，2n=4x=38 ，AACC ）的产量和含油量高，抗逆 性强，占我国和世界油菜的绝大部分种植面积。它是由白菜型油菜（B. rapa/campestris var. oleifera，2n=2x=20 ）与甘蓝（B. oleracea ，2n=2x=18 ）自然杂交后，通过异源四倍体化而来。 提高菜油品质和菜籽饼的利用率是油菜育种的重要目标。与黑籽油菜相比，黄籽油菜的 种皮薄，皮壳率低，木质素和种皮色素少，种子含油量一般要高2～5个百分点，菜油中的色 素污染少，油的精炼成本低，且菜籽饼的蛋白质含量大大提高，粗纤维含量大大降低，可以 用作畜禽饲料或加工食用蛋白的原料，经济价值大大提高。由于黄籽性状可从多方面同时改 善油菜的品质性状，世界各油菜主产国一直把黄籽油菜育种作为选育优质高效油菜新品种的 一个重要性状[1, 2, 3] 。但是，目前国内外甘蓝型油菜黄籽性状的研究与应用仍然存在一些重 要问题。白菜型油菜和甘蓝中均存在表型稳定的天然黄籽基因型，但由它们的基因组融合而 产生的异源四倍体物种甘蓝型油菜中缺乏天然的黄籽基因型，已有的则是1960年代以来瑞典 Olsson、中国刘后利等人从种间远缘杂交的后代中选择而来[1, 3, 4, 5] 。而且甘蓝型油菜的黄籽 性状的遗传机理至今不明，典型特征是黄籽率和黄籽度不高，表型不稳定，易受环