甘露聚糖酶水解酵母细胞壁水解条件研究.docVIP

β-甘露聚糖酶水解酵母细胞壁水解条件的研究 摘要： 采用单因素实验研究了底物浓度、加酶量、反应时间、反应温度和 pH 值 5 个因素对 β-甘露聚糖酶水解酵母细胞壁的影响。在单因素实验基础上，通过正交实验确定了 β-甘露聚糖酶水解酵母细胞壁的最佳水解条件为：底物浓度为 8%，加酶量为 55%，水解时间为 4.5 h，水解温度为 55 ℃，pH 值 6.0。 关键词： β-甘露聚糖酶；水解条件；正交实验；优化 Study on optimization of hydrolysis by β-mannanase in yeast cell wall Abstract: The effects of five factors on the β -mannan enzyme hydrolysis of yeast cell wall, such as the substrate concentration, enzyme dosage, reaction time, reaction temperature and pH value, were studied. The orthogonal test showed that the best optimized hydrolysis conditions were as follow： pH value of 6.0, temperature of 55 ℃, time of 4.5 hours, enzyme dosage of 55%, substrate concentration of 8%. Key words: β-mannanase; decompose by protease; orthogonal experiment; optimize β- 甘露聚糖酶(β-mannanase)是一类能够水解 含有甘露糖苷键的甘露聚糖(包括异甘露聚糖)的内 切水解酶 [1] ，广泛存在于动植物和微生物中，其主 要水解产物为单糖、二糖、三糖、四糖等低聚 糖 [2] 。 随着人们对甘露寡糖生理功能的发现和对 自然界中纤维素资源的利用，β -甘露聚糖酶的研 究和开发进入了一个新高潮，已被广泛应用于食 品、药品、饲料、造纸、印刷业、印染、纺织、 石油开采和生物学研究等领域 [3-6] 。 目前，β-甘露 聚糖酶主要用于水解含有 β-1,4-D-甘露糖苷键的 魔芋粉、角豆角、瓜儿豆等植物原料以生产甘露 寡糖 [7-8] ，而利用 β-甘露聚糖酶水解酵母细胞壁中 α-1,6- 甘露聚糖制取甘露低聚糖的研究未见详细 报道 [9] 。2002 年以来我国啤酒产量实现连续五年 稳居世界第一，有丰富的酵母甘露聚糖资源 。 本 实验是利用实验室保藏的高产 β-甘露聚糖酶菌株 产生的 β-甘露聚糖酶水解酵母细胞壁中 α-1,6- 甘露聚糖来制取甘露低聚糖，通过研究底物浓度、 加酶量、反应时间、反应温度和 pH 值对 β-甘露 聚糖酶水解酵母细胞壁效果的影响，以确定 β-甘 生物工程 ·7·FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食 品 科 技 2009 年 第 34 卷 第 2 期 露聚糖酶水解酵母细胞壁获得甘露低聚糖的最优 条件，为今后有效利用啤酒发酵残渣生产甘露低 聚糖提供参考。 1 材料与方法 1.1 实验材料 酵母细胞壁：自制；高产 β-甘露聚糖酶菌株 F1-5-10：实验室保藏。 发酵培养基：酵母细胞壁 20 g，KNO 3 1 g， K 2 HPO 4 ·3H 2 O 0.5 g， MgSO 4 ·7H 2 O 0.5 g， FeSO 4 · 7H 2 O 0.01 g，琼脂 20 g，蒸馏水 1000 mL，pH7.4～ 7.6。 1.2 粗酶液的制备 取高产 β-甘露聚糖酶菌株(F1-5-10)在发酵培 养基中活化，按 10%的接种量接种到 1000 mL 的 三角瓶中，摇床培养 (200 r/min)48 h，500 r/min离 心 5 min ，去除杂质，上清液于 9000 r/min、4 ℃ 离心 10 min，取上清液 [10] 。 1.3 酶活力的测定 标准曲线的绘制：取标准甘露糖水溶液 0、 0.05、0.1、0.2、0.3、1.4 mg/mL 各 1 mL 分别置于 6 支具塞试管中，各加入 DNS 试剂 1 mL，沸水浴 5 min ，显色，然后以流水迅速冷却，加蒸馏水 8mL，以空白液调零，在 540 nm 处测定吸光度， 绘制标准曲线。 0.9 mL 0.5% (w/v) 角豆胶溶液(由 pH 值 7.0 的KH 2 PO 4 -NaOH 缓冲液配制)，50 ℃保温 5 min， 加入 0.1 mL 适当稀释的酶液，60 ℃水浴 10 min， DN