黑胫病菌诱导烟草SSH文库构建及其分析.pdfVIP

10.3724/SP.J.1006.2011.01763 黑胫病菌诱导的烟草SSH文库构建及其分析 苏振刚1 杨爱国1 孙玉合1 罗成刚1 刘贯山1 周 佳2 李元元1 杨帆1 赵百英1 王元英1’* 1中国农业科学院烟草研究所/烟草遗传改良与生物技术重点开放实验室，山东青岛266101；2云南瑞升烟草技术 （集团）有限公司， 云南昆明650106 摘要：黑胫病是危害严重的世界性烟草主要病害之一，探究烟草对黑胫病的抗病机制，可以为该病的综合防治提 供理论依据。本研究以烟草黑胫病抗性品种革新3号为材料，利用黑胫病0号生理小种诱导其水平抗性，分别在接种 后0.5、1、3、6、10和16d取样，通过抑制差减杂交技术(SSH)构建cDNA文库，获得了960个阳性克隆。利用反 向Northern斑点杂交技术对其中240个阳性克隆进行杂交筛选，筛选出57个表达差异明显的基因，序列拼接后获得 33条高质量EST，测序及其比对分析表明，革新3号对烟草黑胫病抗性相关基因主要涉及抗病防卫、光合作用、信 号传导和能量代谢等方面。进一步基因功能分析显示，病程相关PRlb蛋白、半胱氨酸蛋白、延伸因子1-a、α-微管 蛋白、细胞色素P450、精胺合成酶、水通道蛋白、过氧化物酶体膜蛋白、甘氨酸延伸因子等可能参与了烟草与黑胫 病菌非亲和互作过程。 烟草；黑胫病病菌；抑制差减杂交；反向Northern斑点杂交；非亲和互作 ConstructionandAnalysisofTobaccoSSHLibraryInducedbyPhytophthora parasiticavar.nicotianae SUZhen-Gang YANG Ai-GuoSUN Yu-HeLUOCheng-GangLIU Guan-ShanZHOU Jia LIYuan-YuanYANGFanZHAOBai-YingandWANGYuan-Ying 本研究由国家烟草专卖局科技项目(110201002002，110200902044)和山东省烟草专卖局科技项目(200837)资助。 2011-03-15 2011-06-25 1764 1765 1766 1767 1768 @@[1]ZhuX-C(朱贤朝)，WangY-T(王彦亭)，WangZ-F(王智发).To baccoDiseasesinChina（中国烟草病害）.Beijing:ChinaAgricul turePress,2002.pp21-37(inChinese) @@[2]HouM-S(侯明牛)，HuangJ-B(黄俊斌).AgriculturalPlantPa thology（农业植物病理学）.Beijing:SciencePress,2011.pp 321-334(inChinese) @@[3]ShangZ-Q(尚志强).Recentresearchadvanceonpathogenand diseaseoccurrenceoftobaccoblackshankanditsintegratedcon trol.RevChinaAgricSciTechnol（中国农业科技导报），2007, 9(2):73-76(inChinesewithEnglishabstract) @@[4]WangD-L(王德龙)，YeW-W(叶武威)，WangJ-J(王俊娟)，Song L-Y(宋丽艳)，FanW-L(樊伟丽)，CuiY-P(崔宇鹏).Construction ofSSHLibraryanditsanalysesofcottondroughtassociated