干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片SSH文库构建及CkWRKY1基因克隆.pdfVIP

第 49卷 第 7期 林 业 科 学 Ve1．49．No．7 2013年 7月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Ju1．，2013 doi：10．11707／j．1001—7488 干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片 SSH文库构建及 CkWRKY1基因克隆术 杨 杞 张 涛 王 颖 李 高 尹佳佳 韩晓敏 齐力旺 李国婧 王瑞刚 (1．内蒙古农业大学生命科学学院 呼和浩特 010018； 2．北京市颐和园管理处 北京 100091； 3．中国林业科学研究院林业研究所 北京 100091) 摘 要 ： 为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制 ，挖掘干旱响应相关基 因，成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑 制性差减杂交 (SSH)文库 ，获得 1286条高质量的EST序列，平均长度 475bp，拼接得到Unigenes645条。对这些 Unigenes进行 Blast比对注释后发现很多抗旱相关基 因，例如 LEA蛋 白、DHN蛋 白编码基 因，MYB、bZIP、WRKY、 NAC和 bHLH转录因子等 。通过 RACE技术克隆其 中 1个 WRKY转录 因子 的cDNA全长 ，命名为 CkWRKY1， GenBank登录号为 JX987095。CkWRKY1编码 330个氨基酸 的蛋 白质 ，氨基酸序列 中有 1个 “WRKYGQK”的WRKY 转录因子家族保守序列，属于第 Ⅱ类 WRKY转录因子 。利用实时荧光定量 PCR技术检测发现 ，CkWRKY1基 因在干 旱处理后 mRNA的表达水平 明显上升 ，预示该转录因子可能与柠条锦鸡儿抗旱的分子机制相关 。 关键词 ： 柠条锦鸡儿 ；干旱胁迫 ；抑制性差减杂交 (SSH)文库 ；WRKY；基因克隆 中图分类号：$718．46 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—7488(2013)07—0062—07 ConstructionofaSuppressionSubtractiveHybridizationLibraryof Caragana korshinskiiUnderDroughtStressandCloningOf WRK Gene YangQi ZhangTao WangYing LiGao YinJiajia HanXiaomin QiLiwang LiGuojing WangRuigang (1．CollegeofLifeSciences，InnerMongoliaAgriculturalUniversity HohhotOlOOl8；2．BeijingSummerPalaceManagement Offwe Bejiing100091；3．ResearchInstituteofForestry，CAF Beifing100091) Abstract： Caragana korshinskiiisan importantcultivated shrub with high ecologicaland foragevalue，andwidely distributesinNorthwestChina．C．korshinskiihasastrongtolerancetodrought，cold，heat，salineandpoorsoil．Inorder tostudyitsresistancemechanismstodroughtand explorefordroughtresponserelated genes，a suppression subtractiv