Thermobifida+fusca产麦芽糖α-淀粉酶基因的克隆、表达及分子改造.pdfVIP

改造 摘 要 淀粉酶是一类重要的工业用酶，目前淀粉酶的主要工业用途是用于生产 葡萄糖和麦芽糖。大多数的O【．淀粉酶催化水解淀粉产生大量糊精和葡萄糖， 但也有报道，有些O【一淀粉酶水解淀粉主要产物是麦芽糖。麦芽糖因具有甜 度低、吸潮性低、防止淀粉老化等优良性质而广泛应用于食品、生物医药 等工业领域，因而寻找高产麦芽糖的0【．淀粉酶成为淀粉酶工业领域中一个 研究热点。 基因前段信号肽的伐．淀粉酶基因片段(咖)，并克隆至表达载体pSE380上， SDS．PAGE显示有少量目的蛋白。 本研究采用半理性设计方法，以Yellowmealworm 信号肽后的序列)作为定点饱和突变位点；同时比对分析不同来源的产麦芽 有少量提高；将突变酶咖通过反向PCR进行移码突变可以得到的 Thermomonospora 麦芽糖产量有明显提高，由野生型咖的33．2％提高到了43．9％，其酶的比 活力、最适温度和最适pH分别为156．OU／mg、65C、6．0。 关键词：T．fusca；仅．淀粉酶基因；信号肽；克隆；比对分析；定点突变； 定点饱和突变 S10NANDMOLECULAR CLONING，EXPRES OFAMALTOSE。FORMING 0c．AMYLASEGENEFROM ABSTRACT isakindof in has Amylase veryimportant enzymesindustry field，today,it been to andmaltoseasthe industrial widelyappliedproduceglucose major of are of the of usage．Mosta—amylasescapable catalyzing productionhigh ofdextrinand on that yields glucosedegradingstarch．However,some amylases specificallymaltoseasthe fromstarchhavebeen produce majorproduct has excellent whenusedin reported．Maltosemany properties and includeamild pharmaceuticalindustries，these tostore sweetness，ability wellin the of moisture，and