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河南农业科学 ,2013,42(6):85—87,120
JournalofHenanAgriculturalSciences
甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆
及在大肠杆菌中的表达
秦艳红,乔 奇,张德胜,田雨婷,王 爽,王永江,张振 臣
(河南省农业科学院植物保护研究所 ,河南省农作物病虫害防控重点实验室,
农业部华北南部农作物病虫害综合治理重点实验室,河南 郑州 450002)
摘要 :克隆甘薯褪绿矮化病毒 (SPCSV)外壳蛋 白(CP)基 因,构建其原核表达栽体,并在大肠杆菌
中进行诱导表达。根据 已报道的甘薯褪绿矮化病毒西非(WA)株系基因组核苷酸序列设计引物,
利用RT—PCR方法克隆了SPCSV 四川分离物基 因组 RNA2上 1902bp大小的片段 。序列分析
表 明,该片段包括部分p60基 因序列、完整的 基 因和CP基 因(majorCP)序列及部分mCP基 因
(minorCP)序列。CP基 因由774个核苷酸组成,编码 257个氨基酸残基 ,与 已发表的SPCSVWA
株 系Can181—9分离物相 比,其核苷酸和氨基酸序列一致性分别为 99.48 和 99.22 。将CP基
因克隆到原核表达栽体 pET一30a(+)上,SDS—PAGE分析表 明,经 IPTG诱导,CP基因在大肠
杆菌BL21(DE3)中获得 了高效表达,表达的融合蛋 白分子量约为 38kD,为 SPCSV抗血清的制备
及其血清学检测技术的建立奠定 了基础 。
关键词:甘薯褪绿矮化病毒;基因克隆;序列分析;外壳蛋 白;原核表达
中图分类号:$436.32 文献标志码 :A 文章编号 :1004—3268(2013)06—0085—04
CloningandExpressionofCoatProteinGeneofSweetPotato
ChloroticStuntVirusinE.coli
QIN Yan—hong,QIAO Qi,ZHANG De—sheng,TIAN Yu—ting,
WANGShuang,WANGYong-jiang。ZHANG Zhen—chen
(HenanKeyLaboratoryofCropPestControl,IPM KeyLaboratoryinSouthernPartofNorthChinaforMinistry
ofAgriculture,InstituteofPlantProtection,HenanAcademyofAgriculturalSciences,Zhengzhou450002,China)
Abstract:Theobjectiveofthisstudywastocloneandanalyzethesequencecharacterizationofthe
coatprotein (CP)geneofsweetpotatochloroticstuntvirus(SPCSV),andthentoconstructits
prokaryoticexpressionvectorandexpressitsprotein inEscherichiacoliBL21(DE3).Thepri—
mersweredesignedaccordingtopublishednucleotidesequenceofSPCSV__WA Can181—9isolate
(FJ807785).ThepartialnucleotidesequenceofSPCSV genomicsegmentRNA2wasclonedbv
RT—PCRfrom SichuanisolateinC:hinaandsequenced,whichwas1902bpinlength(KC146844),
encompassingpartofthep60gene,completep8andCP genes,andpartofmCP gene.Theresults
ofsequencingshowedthattheCP geneconsistedof774ntandenc
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