甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达.pdf

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河南农业科学 ,2013,42(6):85—87,120 JournalofHenanAgriculturalSciences 甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆 及在大肠杆菌中的表达 秦艳红,乔 奇,张德胜,田雨婷,王 爽,王永江,张振 臣 (河南省农业科学院植物保护研究所 ,河南省农作物病虫害防控重点实验室, 农业部华北南部农作物病虫害综合治理重点实验室,河南 郑州 450002) 摘要 :克隆甘薯褪绿矮化病毒 (SPCSV)外壳蛋 白(CP)基 因,构建其原核表达栽体,并在大肠杆菌 中进行诱导表达。根据 已报道的甘薯褪绿矮化病毒西非(WA)株系基因组核苷酸序列设计引物, 利用RT—PCR方法克隆了SPCSV 四川分离物基 因组 RNA2上 1902bp大小的片段 。序列分析 表 明,该片段包括部分p60基 因序列、完整的 基 因和CP基 因(majorCP)序列及部分mCP基 因 (minorCP)序列。CP基 因由774个核苷酸组成,编码 257个氨基酸残基 ,与 已发表的SPCSVWA 株 系Can181—9分离物相 比,其核苷酸和氨基酸序列一致性分别为 99.48 和 99.22 。将CP基 因克隆到原核表达栽体 pET一30a(+)上,SDS—PAGE分析表 明,经 IPTG诱导,CP基因在大肠 杆菌BL21(DE3)中获得 了高效表达,表达的融合蛋 白分子量约为 38kD,为 SPCSV抗血清的制备 及其血清学检测技术的建立奠定 了基础 。 关键词:甘薯褪绿矮化病毒;基因克隆;序列分析;外壳蛋 白;原核表达 中图分类号:$436.32 文献标志码 :A 文章编号 :1004—3268(2013)06—0085—04 CloningandExpressionofCoatProteinGeneofSweetPotato ChloroticStuntVirusinE.coli QIN Yan—hong,QIAO Qi,ZHANG De—sheng,TIAN Yu—ting, WANGShuang,WANGYong-jiang。ZHANG Zhen—chen (HenanKeyLaboratoryofCropPestControl,IPM KeyLaboratoryinSouthernPartofNorthChinaforMinistry ofAgriculture,InstituteofPlantProtection,HenanAcademyofAgriculturalSciences,Zhengzhou450002,China) Abstract:Theobjectiveofthisstudywastocloneandanalyzethesequencecharacterizationofthe coatprotein (CP)geneofsweetpotatochloroticstuntvirus(SPCSV),andthentoconstructits prokaryoticexpressionvectorandexpressitsprotein inEscherichiacoliBL21(DE3).Thepri— mersweredesignedaccordingtopublishednucleotidesequenceofSPCSV__WA Can181—9isolate (FJ807785).ThepartialnucleotidesequenceofSPCSV genomicsegmentRNA2wasclonedbv RT—PCRfrom SichuanisolateinC:hinaandsequenced,whichwas1902bpinlength(KC146844), encompassingpartofthep60gene,completep8andCP genes,andpartofmCP gene.Theresults ofsequencingshowedthattheCP geneconsistedof774ntandenc

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