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中 国人兽共 患病 学报
2O13，29 (8) ChineseJournalofZoonoses 757
DOI：10．3969／cjz．j．issn．1002—2694．2013．08．005
猪链球菌细胞壁蛋 白SSU051000的表达、
—
纯化及活性分析
王 涛 ，郑玉玲 ，袁 媛 ，江 华 ，郝淮杰。，李雪琴。，姜永强 ，。
摘 要 ：目的 构建猪链球菌细胞壁蛋 白SSU05
— 1000基 因的重组表达质粒，在大肠杆菌 BL21(DE3)中高效表达 ，并研
究其对细胞 间紧密连接的调控作用 。方法 以05ZYH33基 因组为模板设计 引物 ，构建 pET30a—SSU05
— 1000重组表达质 粒，
转化到大肠杆菌 中诱导表达，用镍亲和层析的方法对 目的蛋 白进行纯化 ，Westernblot检测其对人脑微血管 内皮细胞紧密连
接 的调控。结果 构建 的SSU05— 1000重组表达质粒能够在大肠杆菌 中高效表达 ，纯化 的SSU051000蛋 白纯度达 90％以
—
上 ，Westernblot结果显示其与人脑微血管 内皮细胞 (hCMEC／D3)相互作用后，可 以下调细胞 间紧密连接蛋 白C1audin一5的表
达 。结论 SSU05
— 1000蛋 白能够破坏人脑微血管 内皮细胞 的紧密连接结构，提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB，blood—
brainbarrier)过程 中起重要作用 。
关键词 ：猪链球菌；SSU05—1000；紧密连接
中图分类号 ：R378 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2694(2013)08—0757—05
Expression，purificationandactivityassayofStreptococcussuis
cellwall
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