四肽Epithalon对HepG2细胞和L-02细胞端粒及端粒酶活性影响.pdf

Master Dissertation of Chongqing University Effects of Tetrapeptide Epithalon with Telomere and Telomerase Activities in HepG2 and L-02 Cells Master Candidate: Tong Shiliang Supervisor: Prof. Wang Yuanliang Major: Medicinal Chemistry College of Bioengineering Chongqing University November, 2007 摘 要 目的：动物的一种内分泌腺——松果体，能分泌一种名为“Epithalamin” 的缩氨 酸，这种成分可被人工合成名叫“Epithalon” 的四肽（Ala-Glu-Asp-Gly ）。有报道 Epithalon 在动物体内具有一定的肿瘤抑制作用，本文的目的就是研究 Epithalon 作 用于人肝癌细胞 HepG2 后，对 HepG2 细胞的生长情况、细胞端粒长度以及细胞端 粒酶活性所产生的影响。同时，通过和 Epithalon 作用于人胎肝细胞 L-02 后细胞生 长情况、端粒长度以及端粒酶活性的变化进行对比，研究 Epithalon 对细胞端粒和 端粒酶的影响，探寻其可能的作用机制。 方法：（1）采用 Fmoc 固相多肽合成法制备 Epithalon 四肽，高效液相层析 （HPLC ）纯化处理，运用NMR 和质谱进行分析鉴定。 （2 ）通过MTT 法检测 Epithalon 四肽对人肝癌细胞株HepG2 以及人胎 肝细胞 L-02 增殖与活力的影响；用细胞形态学观察用药后细胞的生长情况，流式 细胞仪检测细胞周期。 （3 ）根据MTT 检测结果，特定浓度用药一段时间后，运用端粒酶重复 序列扩增-焦磷酸根酶联发光技术（TRAP-ELIDA ）检测人肝癌细胞株HepG2 和人 胎肝细胞 L-02 端粒酶活性，流式荧光原位杂交法（FLOW-FISH ）检测端粒长度。 结果：（1）核磁与质谱结合分析鉴定表明，合成产物确为Epithalon 四肽。 （2 ）MTT 法检测 Epithalon 四肽对人肝癌细胞株 HepG2 增殖与活力的 影响显示： 低浓度（0.00256～0.0256μmol/L ）和高浓度（25.6μmol/L ）的Epithalon 对细胞生长影响不大，而 0.256～2.56μmol/L 的 Epithalon 对 HepG2 细胞有一定抑 制作用。流式细胞仪检测细胞周期表明，Epithalon 有一定的 S 期阻滞作用。Epithalon 对人胎肝细胞株L-02 增殖与活力的影响显示：2.56μmol/L～25.6μmol/L 的Epithalon 对 L-02 细胞增殖有促进作用。 （3 ）运用TRAP-ELIDA 检测人肝癌细胞株 HepG2 端粒酶活性，流式荧 光原位杂交法（FLOW-FISH ）检测端粒长度的变化，发现加入 Epithalon 后对 HepG2 细胞的端粒酶活性和端粒长度有一定的促进或延长作用，但这种作用并不明显。 对 L-02 细胞而言，Epithalon 能有效的提高细胞端粒酶活性，并使细胞端粒的长度 得到延长。 结论：研究显示特定浓度的 Epithalon 在体外对肿瘤细胞 HepG2 有一定的抑制 作用，这种抑制作用可能主要表现为 S 期阻滞，其对 HepG2 细胞端粒酶和端粒长 度也有一定的正向影响。与此同时，Epithalon 和人胎肝细胞 L-02 的作用显示， Epithalon 具有激活端粒酶，延长端粒、促进 L-02 细胞生长的作用。这提示我们， I Epithalon 能通过提高端粒酶活性来延长端粒，进而起到延长正常细胞乃至生物体 寿命的作用。Epithal