白花前胡合剂经PI3-K%2fAkt信号转导途径对脑缺血再灌注大鼠神经保护机制研究.pdf

中文摘要 目的 本研究拟从脑缺血再灌注后P13-K／akt信号转导通路方面入手，探讨 白花前胡合剂抗脑缺血再灌注损伤的作用机制，为临床实践进一步提供实 验依据。 方法 1 0～32 1)将10只体重28 09的健康雄性SD大鼠随机分为正常组， 假手术组，脑缺血再灌注组(模型组)、白花前胡合剂+缺血再灌注组(白 94 花前胡合剂组)、白花前胡合剂+缺血再灌注+LY2002组(抑制剂组)五 组，每组22只大鼠。假手术组和模型组给予生理盐水2ml灌胃，每日2 次，连续7日。白花前胡合剂组、抑制剂组予白花前胡合剂6ml／kg．d， 分2次灌胃，灌胃时将白花前胡合剂用生理盐水稀释到2ml，连续7日。 第7天灌胃完成30min后开始造模，采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血 5mi 模型，术后2小时进行再灌注。其中抑制剂组于再灌注前1 n经尾静 脉注射0．3mg／kgLY294002。假手术组线拴插入深度为8～10mm，其余操 作同手术组。 2)脑缺血再灌注24h进行神经功能缺损评分。运用HE染色观察MCAO 大鼠缺血侧脑组织的病理形态学改变。行TTC染色观察梗死面积比。 blot法观察 3)脑缺血再灌注24h，运用免疫组织化学法及Western 白花前胡合剂对缺血脑组织P13-K、hKt蛋白表达的影响。 4)脑缺血再灌注24h，TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡，并用免疫 组织化学方法检测缺血区脑组织caspase-9表达水平。 tern blot法检测脑组织NF-KB、COX-2的表达量。 6)脑缺血再灌注24h，用免疫组织化学方法检测缺血区脑组织HIF-1 a、VEGF水平。 结果 1)各组大鼠脑缺血再灌注24h神经功能缺损情况观察：假手术组大 鼠活动正常，步态平稳，肌力无减弱，未出现明显的神经功能缺损症状； 与假手术组比较，模型组大鼠出现明显的运动功能障碍，神经功能评分明 显升高(P0．05)；白花前胡合剂组可明显改善缺血再灌注损伤大鼠的运动 障碍，与模型组比较有显著性差异(P0．05)，抑制剂组大鼠神经功能评分 较之模型组有一定的降低，但无统计学差别，与白花前胡组比较则有显著 性差异(P0．05)。 2)各组大鼠脑缺血再灌注24h病理组织学变化：正常组与假手术组 HE染色显示大脑皮层及海马区神经元排列整齐有序，结构清晰。模型组 大鼠缺血核心区细胞数明显减少，核固缩深染，组织疏松，有细胞肿胀、 胞核溶解、碎裂等细胞坏死特征。缺血周围区细胞体积缩小，数量减少， 层次不清，排列也较为紊乱，胞核固缩浓染，间质水肿。白花前胡合剂组 缺血核心区及半影区较模型组神经细胞层次较清楚，数目增加，且较为完 整，间质水肿减轻，抑制剂组病理损伤较模型组类似。 均匀的橘红色，未检测到脑梗死病灶。脑缺血再灌注组大鼠脑组织出现大 面积梗死。白花前胡合剂组大鼠脑梗死体积显著减少，与模型组相比有显 著性差异(P0．05)；而抑制剂组可抑制白花前胡合剂减轻大鼠脑梗死体积 的作用，抑制剂组梗死体积与模型组差异无显著性(P0．05)，与白花前 胡合剂组比较有显著性差异(P0．05)。 4)各组大鼠脑缺血再灌注24h脑组织PI3-K／p-Akt免疫组织化学检 测：假手术组脑组织PI3一K和p-Akt阳性细胞比较散在，分布在大脑皮 3一K、 质及皮质下组织；脑缺血再灌注24h后，模型组缺血侧脑组织PI p-Akt阳性细胞数较正常组无明显变化；脑缺血再灌注前予白花前胡合剂 处理显著增加缺血侧脑组织PI 3-K和p-Akt的表达，主要分布于缺血脑组 织及缺血周边区；而抑制剂组抑制了白花前胡合剂的这一作用。