酸性间胺黄与牛血清白蛋白相互作用的研究.pdfVIP

第28卷，第10期 光谱学与光谱分析 2oo and AnalySis ()ctober，2008 8年1o月 SpectroscopySpectral 酸性间胺黄与牛血清白蛋白相互作用的研究 陈宁生，张国庆，郑 欣 安徽工程科技学院生物工程系，安徽芜湖24looo 摘要利用荧光光谱和紫外可见光谱研究了酸性间胺黄与牛血清白蛋白的相互作用。结果表明，酸性问 胺黄对牛血清白蛋白的荧光猝灭是形成了超分子复合物的静态猝灭过程。测定了不同温度下MY-BsA结合 常数KA以及其相互作用的热力学参数，并根据热力学参数确定了酸性间胺黄与牛血清白蛋白之间作用力 类型主要是静电作用。据F6rster非辐射能量转移理论，推导出给体与受体间的结合距离。 关键词酸性间胺黄；牛血清白蛋白；荧光光谱；紫外可见光谱；相互作用 文献标识码：A 中图分类号：()644．1 文章编号：looo-0593(2008》10-0335一02 酸性间胺黄又名皂黄(metanilyellow，简称MY)，主要生的内源荧光，而且在固定浓度的BSA溶液中加入MY后， 用于肥皂的着色和羊毛、丝绸织物的染色和印花，也可用于 BsA荧光强度降低，说明MY对BsA荧光有猝灭作用，随 染皮革、漆类及木制品着色、生物着色。研究表明，该类色 着MY浓度的增加，猝灭作用有规律地逐渐如强。用 素有中等毒性，可引起肝脏细胞损伤，导致肝癌的发生。在 国家强制性标准GB2760中未规定其可作为食品色素添加收光谱可以发现，在一定浓度的MY溶液中加入BsA后，结 剂使用，但近来发现些不法生产者，违法地将酸性胺黄用于 合物的吸收峰明显下降。光谱分析都说明MY与BSA之间 豆腐干、大黄鱼等，以达到改变产品外观以次充好的目 存在明显的相互作用。 的￡1]。为阐明MY在生物体内抑制能量代谢、破坏细胞结构 为了研究MY与BsA之间的相互作用，考察了MY对 和干扰生物合成的信息，本文研究了在一定条件下，MY与 BSA荧光猝灭机理。假设其作用过程为动态猝灭，根据 牛血清白蛋白(BSA)结合反应的荧光光谱和紫外可见光谱，stenl-Vblmer方程，测定298和3loK时的Fo／F并分别对 以及其相互作用的机理。 [Q】MY作图。结果表明：当温度升高时，猝灭曲线斜率降低， 固定激发波长280衄，用F-4500荧光分光光度计扫描可以初步推测该猝灭过程不是动态猝灭。设生物大分子的荧 BsA以及MY-BsA溶液在pH6．6时的荧光光谱(见图1)。光寿命为1．o×10q L 从图l可以看出，BSA中只有色氨酸残基在350姗左右产与BsA双分子猝灭过程的速率常数Kq分别为3．o×1013 ·IIlol-1·s一1(298 L·mol-1·s-1(310 140 K)和2．4×1013 K)， 120 均大于各类猝灭剂对荧光体最大扩散控制的碰撞猝灭常数 2．o×10”L·nlorl·s一，进一步证实了动态猝灭假设不成 100 立，MY对BsA荧光猝灭是静态猝灭过程，它们之间形成了 80 k 不发荧光的超分子复合物。 60 40 1／(Fo—F)对C诫作图，得到超