β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的诱导表达.pdfVIP

夕一葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 摘要 论文以获得高活力外源夕一葡萄糖苷酶及开发利用发酵液残渣酵母为目标，以基因工 程菌GSll5 bgll为菌株，研究了肛葡萄糖苷酶诱导表达的适宜条件及其酶学特性；在此基 础上，进行了5L发酵罐放大发酵实验；并就如何利用发酵液中的酵母进行了探索性的研 究。结果表明： 基因工程菌GSll5 添加硫酸铵，磷酸二氢钾，Tween80，油酸可提高伊葡萄糖苷酶的酶活。 发酵罐的高密度发酵结果表明，甲醇诱导72h后，伊葡萄糖苷酶活可达145IU／mL，蛋 白表达量可达7500mg／L。与摇瓶相比，最高酶活及胞外蛋白表达量分别提高了1．87倍和 1．79倍，是出发菌株黑曲霉产酶能力的33．6倍，实现了鼻一葡萄糖苷酶的高效表达。 利用浓盐法提取发酵液残渣酵母中的核酸时，核酸得率为1．56％，提取率为2．71％，纯 度达97．2％，分子量在19392bp左右。利用碱法提取发酵液残渣酵母中的多糖时，可得到 高附加值的伊1，3．D．葡聚糖和甘露聚糖两种多糖。通过对发酵液中的酵母进行综合利用， 既减少了废酵母的大量排放对环境的污染，同时也为核糖核酸及多糖提供了新的来源。 关键词：重组毕赤酵母；伊葡萄糖苷酶；表达条件优化；高密度发酵；酵母菌的综合利用 lnductionand of cosidase eXpreSSIOn fl-glu In gene V Abstract Inordertoobtain and andutilizationofresidues highactivityfl-glucosidasedevelopment offermentationresearchtookastrainof GSl15 as liquid,this engineeringbgtl yeast genetic and thefermentationstrain．The conditionsofinduction appropriate expression andits were this 5Lfermentorfermentation studied；onbasis，a enzymaticproperties enlarge werecarried howtouse offermentationwere experiment out；on yeast liquid exploratory studied． thatthe conditions and Theresultsindicated ofinduction appropriate expression wereinitial 0．1％histidineandO．4％PTMl fl-glucosidasepH6．0ofFM21，adding respectivel