不同食性鱼类胰蛋白酶的提纯、性质及蛋白消化力的比较研究.pdfVIP

摘要 摘要 胰蛋白酶是鱼类消化道中主要的碱性蛋白水解酶之一，属丝氨酸蛋白酶类， 多存在于鱼类肝胰脏和幽门垂中，以酶原形式分泌，进入消化道后在肠激酶和 Ca2+的作用下，去除激活肽后成为有活性的胰蛋白酶。鱼类的食性可分为草食性、 肉食性和杂食性。本实验分别选取三种食性鱼类中常见的草鱼、青鱼和鲫鱼作 代表，对其胰蛋白酶进行分离提纯，比较不同食性鱼类胰蛋白酶在催化性质上 的差异，并采用蛋白消化率和酶解动力学相结合的方法，对胰蛋白酶纯化酶液 在离体条件下的酶解消化力进行较全面的研究，为研制和开发不同食性鱼类配 合饲料、提高饲料蛋白的利用率提供一定的理论基础。 1、不同食性鱼类胰蛋白酶的分离纯化 草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶的分离纯化主要通过粗提液的提取、硫酸铵分 级沉淀、亲和层析和SDS．PAGE测定分子量四步进行。 结果显示，分别使用40％-80％、30％．70％、20％．60％的硫酸铵溶液可收集 到大部分草鱼、鲫鱼、青鱼的胰蛋白酶。亲和层析洗脱时均使用pH3．0的洗脱液 得到较好的洗脱峰，经测定具有胰蛋白酶活性。SDS．PAGE电泳均只得到单一条 带，测定得草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶相对分子量分别为27．3KDa、26．7KDa、 128．39，最终产率分别为14．64％、16．63％和17．65％。 2、不同食性鱼类胰蛋白酶部分性质的比较研究 以BAPNA作为水解底物，测得草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶的米氏常数Km mol·L-1、0．036rnol·L_1、0．027rrlDl．L1。 值分别为0．030 以TAME作为底物，测得草鱼和鲫鱼的胰蛋白酶的最适pH为8．5，而青鱼 的为9．0。草鱼和鲫鱼胰蛋白酶在pH6．0．10．0范围内相对较稳定，而青鱼的在 pH7．0．10．0范围内稳定性较高。三种鱼胰蛋白酶的最适温度均在40。C左右，在 20．50℃其胰蛋白酶活性相对较稳定。Na+、Ca2+两种离子对这三种不同食性鱼类 胰蛋白酶活性都没有明显的影响，K+对其均有抑制作用，而Mg+对其都具有激 活作用，但激活强度随着Mi+浓度的增加而变弱。EDTA对其均具有较强的抑 制作用。 摘要 3、不同食性鱼类胰蛋白酶消化能力的比较研究 在离体环境中测定草鱼、鲫鱼、青鱼胰蛋白酶纯化酶液对牛血清白蛋白、 酪蛋白、豆粕、棉粕、菜粕、鱼粉和麦麸的酶解动力学和离体消化率，并对其 进行比较。 草鱼胰蛋白酶纯化酶液酶解这七种蛋白质样品生成氨基酸的速率表现为酪 蛋白菜粕棉粕鱼粉牛血清白蛋白豆粕麦麸，鲫鱼的为酪蛋白菜粕牛血 清白蛋白鱼粉豆粕棉粕麦麸，而青鱼的为酪蛋白鱼粉棉粕菜粕豆粕 牛血清白蛋白麦麸，以上测定结果均表现为差异显著(PO．05)。青鱼胰蛋白酶 对鱼粉酶解后产生氨基酸的速率要明显高于菜粕和豆粕的，而草鱼的胰蛋白酶 对菜粕和棉粕的酶解能力要明显高于鱼粉的。由此看来，草食性鱼类的胰蛋白 酶对植物性蛋白的消化力较强，而肉食性鱼类的胰蛋白酶对动物性蛋白的消化 力较强。 关键词：草鱼；青鱼；鲫鱼；胰蛋白酶；纯化；酶解；蛋白消化力 II Abs仃act ABSTRACT 3．4．2 tothe and infish Trypsin(EC1．4)belongsSer-proteasegrouppresents and caeca．Itisoneofthetrainalkaline infish pancreaspyloric proteo虮jCenzymes asinactive isactivatedinthe to gastrointestinal，producedzymogen,which gut enterokinaseand theactive