HBsAg阴性孕妇乙型肝炎病毒宫内感染检测分析.docVIP

HBsAg阴性孕妇乙型肝炎病毒宫内感染检测分析［摘　要］ 目的：探讨使用荧光定量PCR方法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性孕妇乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染情况。方法：选择住院分娩的HBsAg阴性孕妇，使用荧光定量PCR方法检测孕妇及其新生儿的血清中HBVDNA。结果：502例HBsAg阴性孕妇血清HBVDNA阳性40例，其中27例发生宫内感染，宫内感染总阳性率5.38％。以HBeAb+HBcAb+组合模式的宫内感染率最高，达12．50％，而HBVM全阴性者发生宫内感染率最低，为1．10％。结论：HBsAg阴性孕妇也可能发生HBV宫内感染，采用灵敏度高的荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇及新生儿血清中HBVDNA，对发现其HBV宫内感染有重要意义。［关键词］ 乙型肝炎表面抗原；乙型肝炎病毒；垂直传播　　乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性分布，我国是HBV感染的高流行区，慢性感染者有一亿多人［1］。慢性携带HBV的孕妇作为传染源意义很重要，该人群可引起HBV母婴垂直传播和水平传播。以往认为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性者处于恢复期，无传染性，但随着临床检验水平的提高，特别是PCR技术的日趋成熟并广泛使用，发现这部分人群中有相当一部分人血清中可检测到HBVDNA，因而推测HBsAg阴性孕妇有可能存在“隐匿性HBV感染”，并可以造成HBV母婴传播。本研究采用荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇及其新生儿血清HBVDNA，了解这部分孕妇HBV宫内感染情况。 　　1　对象与方法 　　1．1　对象　　　　　　　　　　　　 　　选取2002年1月至2005年12月，在本院住院分娩的孕妇，经酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测乙型肝炎病毒血清学标志物(HBVM)中HBsAg阴性孕妇及其新生儿各502例，所有孕妇无肝炎症状及体征，并排除其他病毒(如：丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等)感染。 　　1．2　标本采集　　　　　　　　　　　　 　　孕妇分娩前、新生儿出生后注射乙型肝炎疫苗前抽取静脉血，分离血清保存备检。 　　1．3　试剂和方法　　　　　　　　　　　　 　　PCR试剂由中山大学达安基因诊断中心提供，标本处理及实验均按试剂盒说明进行，PCR仪由美国生产的ABI 7000荧光定量基因扩增分析仪。 1．4　诊断标准　　　　　　　　　　　　 　　HBVDNA拷贝数＞1×103 copy/ml为阳性。 　　2　结果 　　502例HBsAg阴性孕妇中，血清标本HBVDNA阳性40例，发生HBV宫内感染27例，宫内感染率5．38％，其中以HBeAb+HBcAb+模式的孕妇发生宫内感染率最高，达12．50％，而HBVM全阴性的孕妇，仍有发生HBV宫内感染，宫内感染率为1．10％，具体情况见表1。表1　各种宫内感染的具体情况（略） 　　3　讨论 HBsAg阴性孕妇HBV感染的可能性。经ELISA方法检测血清HBsAg阴性也不能完全排除HBV感染，HBsAg阴性孕妇HBV感染是一个不容忽视的问题。有文章显示，在HBsAg阴性的“健康”人群血清中可检测到HBVDNA［2］。在一般HBsAg阴性人群中确实存在HBV感染，这样的HBV隐匿性感染可能与下列因素有关：HBV基因变异，如S基因变异：S基因中个别氨基酸被替代或短小缺失，影响HBsAg的表达或改变HBsAg的抗原性。HBV复制水平相对较低，血清中复制型HBV水平低，造成HBsAg在血清中水平低下，而使用ELISA方法检测HBsAg的敏感性相当于3×107病毒/ml，而PCR方法的敏感性达3×102～3病毒/ml，提高了近百万倍［3］。宿主因素：HBV在感染的肝细胞中基因表达减少，也可能因病毒颗粒组装或分泌改变，抑制肝细胞的分泌，或HBsAg隐藏在免疫复合物中而未能检出。HBsAg阴性孕妇HBV感染与宫内传播。本研究采用荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇血清HBVDNA，显示502例HBsAg阴性孕妇中HBVDNA阳性40例，这说明了，虽然ELISA方法检测血清HBsAg阴性，但仍有相当一部分孕妇血清有HBV存在。有文章报道：即使HBsAg阴性、HBsAb阳性，肝组织中仍可存在HBV［1］。由于HBsAg阴性孕妇有存在HBV感染的可能，因而可导致HBV母婴垂直传播。本研究显示，502名HBsAg阴性孕妇中，有27人发生宫内感染，宫内感染率达5．38％，由此可见，血清HBsAg阴性而HBVDNA阳性孕妇发生宫内感染的机会很大。母体血中HBVDNA阳性是造成HBV母婴垂直传播的主要因素，而垂直传播是HBV的重要传播途径，不仅造成众多的慢性HBV携带者，也是引起人慢性乙型肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。因此，使用灵敏度高的PCR技术，提高HBsAg阴性孕妇HBV检出率，及早对HBsAg