miR-570对胃癌细胞B7-H1蛋白表达的抑制作用.pdfVIP

《现代免疫学~2012年第 32卷第 4期 miR一570对 胃癌细胞 B7一H1蛋白表达的抑制作用 杨鹏 ，朱健洁 ，孙静 ，李锐。，汪维鹏 ，张学光 (1．苏州大学医学生物技术研究所 ，苏州 215007；2．苏州大学医学部药学院，苏州 215123；3．苏州大学附属第一医院消 化内科 ，苏州 215006) 摘要 ：B7一H1是一种重要 的负性共刺激分子 ，在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用 ，而微小 RNA具有直接的转录后调控作用 。 本文研究 miR一570对B7一H1表达 的调控作用 。首先将 miR一570及其抑制剂anti—miR-570分别转染 B7一HI表达阳性的人 胃癌 细胞 SGC一7901和 B7一H1表达 阴性的人乳腺癌细胞 MDA—MEt435，以流式细胞术检测 B7一H1分子表达情况 ；然后构建 pcDNA／B7一HI表达质粒与 miR一570共转染 CHO细胞 ，以流式细胞术检测 CHO细胞上 B7一H1分子 的表达情况 ；最后分别 构建含 B7一HI基因3-UTR片段和含 miR-570作用靶点序列的荧光素酶表达载体与 miR-570共转染 CHO细胞 ，用双荧光 素酶报告系统检测荧光素酶活性 。结果显示 miR-570能显著抑制 SGC一7901细胞和 B7一H1基 因转染细胞膜上 B7一H1蛋 白的 表达 ，并能显著抑制荧光素酶表达载体表达的荧光素酶蛋 白，而且 anti-miR一570能上调 MDA—MB-435细胞上 B7一H1表达 。 本研究证明miR一570能显著抑制 B7一HI蛋白表达，为通过抑制B7-H1信号通路以增强机体抗肿瘤免疫力的治疗途径奠定 了基础 。 关键词 ：miR一570与B7一HI；SGC7901细胞、MDA—MB-435细胞与 CH0细胞 ；重组质粒 ；双荧光素酶报告系统 中图分类号 ：R392．11 文献标识码 ：A 文章编号：1001—2478(2012)04-0270—06 业已证实，T细胞的有效活化和功能介导需要 活化和增殖来负性调节免疫应答 ，并在肿瘤细胞免 双重信号的协同作用 ：一是抗原肽一MHC复合物 ， 疫逃逸机制中发挥着极其重要 的作用。该分子可诱 由T细胞抗原受体 (TCR)识别 ；二是协同刺激信 导 T细胞分泌抑制性细胞 因子 IL一10，同时介导 T 号 ，由抗原提呈细胞 (APC)和 T细胞表面的协 同 细胞的凋亡 ，从而影 响 T细胞的抗肿瘤能力 ，导 刺激分子配体和受体对提供。其 中，B7一CD28是 致肿瘤免疫逃逸和肿瘤的发展及侵袭。因此 ，如果 迄今为止公认的最基本的协 同刺激信号 ，由表达在 能寻找到一种有效抑制 B7一H1表达 的方式 ，阻断 T细胞上的 CD28和表达在抗原提呈细胞表面的 B7一H1信号通路，再配合其他治疗手段，将有助 B7—1和 B7—2相互作用产生l1]。经过多年研 究 ， 于增强机体的抗肿瘤免疫力[5]。研究发现 B7一H1 B7一CD28协 同刺激信号 的内容得到 了极大 的丰 的utRNA广泛表达于多种非淋 巴组织 ，而其蛋 白 富，包括数个结构和功能相似的配体和受体组成的 在正常组织 中的表达限于免疫细胞 ，特别是单核巨 B7一CD28家族，其中B7分子的主要成员有 B7—1、 噬细胞_6]。最近发现，B7一H1蛋 白广泛表达 于多 B7—2、B7一DC、B7一H1、B7一H2、B7一H3和 B7一H4 种肿瘤组织，如胃癌 、肠癌、肺癌 、卵巢癌、黑色 等，受体包括 CD28、CTLA一4、ICOS、PD一1和 素瘤 、头颈肿瘤和乳腺癌等，具有显著的临床相关 BTLA等 ]。这些协同刺激信号分子不仅提供促进 性 ，并且与患者预后之间也显著相关 [7]。这些研究 T细胞生长、分化和产生细胞因子的正性信号 ，同 结果提示 ，B7一H1蛋 白表达受到转录后调控。 时还能通过提供负性信号来限制、终止和／或减弱 越来 越 多 的研究表 明，微 小 RNA(microR— T细胞