特异扩增BBTV基因组Ⅲ、Ⅳ、Ⅰ编码区部分序列及其在检测中的应用.pdfVIP

卷 期 微 生 物 学 报 ! %’(! 0( 年 月 #$$ # !#$%’()(*($,-$ )*+,-., #$$ + / !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 特异扩增 基因组 、 、 编码区部分序列 ::;% ! # 及其在检测中的应用 孙德俊 毛国杰 孙 卉 腊 平 蔡文启 （中国科学院微生物研究所 北京 ） $$$9$ 关键词： ， 和 ， ，检测，克隆 ::;%5065! # =? 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） @!7#(! 6 $$$58#$3 #$$ $5$$35$! 香蕉束顶病（ ）是香蕉植株的一种毁灭性病害，正在世界（包括中国）的许多香蕉种植区蔓 ::; ［ ］ 延 $A 。其病原物为香蕉束顶病毒（ ， ），被列为我国第三类检疫对象。 :.B.B.:-BCD ; %F,-G ::;% / E 目前生产上主要采用培育脱毒组培苗来防治::; 的发生，因此建立一种能快速、灵敏、特异地检测 ::;% 的方法就显得很重要。国内现在大多采用HIJK6方法，但其灵敏度不够高，且需要制备特异性强 的抗血清，否则较易出现假阳性。参照漳州分离物 基因组 ， 、 编码区的 序列，分别设 ::;% ! # 06 计一对引物，建立了一种通过=?特异地扩增编码::;%外壳蛋白、复制起始蛋白和运动蛋白部分序 列的::;%检测方法。该方法也适用于我国其它地区香蕉植株或香蕉组培苗中::;% 的检测。 ! 材料和方法 !! 植物材料 具典型香蕉束顶病症状的香蕉植株采自漳洲地区，无::;%感染的香蕉组织取自无::;% 的香蕉 组培苗。 !# 植物组织总$%的提取 法：按文献［］方法进行。 !#! ;6: 9 碱法：取 植物组织，加入 ／ 的 ，充分研磨后， ／ 离心 !## $$#$L $$I$N4L’I 0.OP 9$$$,LFB M % ，上清液稀释 倍后备用。 4LFB $ !’ 工具酶、试剂和序列测定 聚合酶和 购自 公司； 购自 公司； 载体 ;. 06 06R*’HST,.CTFB1FT K.BB U0;=G VK: RHW5; Q M E 购自 公司。序列由 上海博亚生物技术有限公司测定。其它试剂均为国