凝集素芯片检测糖蛋白方法的建立及应用.pdfVIP

凝集素芯片检测糖蛋白方法的建立及应用 中文摘要 目的：蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰，它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、 细胞癌变等生命活动中起着重要作用，因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重 视，但由于缺乏一种能简便、快速、高通量的检测手段，蛋白质糖基化修饰的研究发展 缓慢。本实验的目的在于尝试将凝集素结合糖蛋白糖链的特异性与芯片技术的高通量 性、灵敏性结合起来建立凝集素芯片检测糖蛋白技术。并尝试利用凝集素芯片分析检测 肝癌血清、肝细胞膜蛋白及大骨节病血清与其对照中的差异，以期发现差异糖蛋白，为 肝病及大骨节病的早期诊疗提供依据。 方法：将凝集素固定与环氧化修饰的玻片表面，用Cy3荧光染料标记标准糖蛋白、血清 及膜蛋白，利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法，并分析 肝癌血清、肝细胞膜蛋白及大骨节病血清与其对照中的差异。 结果：通过对封闭条件、孵育条件的摸索，确定出最佳封闭剂是含1％BSA的磷酸缓冲 的磷酸缓冲液。利用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性。用包含10种凝 检测糖蛋白糖链的可行性。利用凝集素芯片分别对肝癌血清和健康人血清、正常肝细胞 Chang’S 和透明质酸治疗后血清进行了分析检测，发现： 1．肝癌病人血清中糖蛋白的糖链分支数