随机引物聚合酶链反应法鉴定2例无菌性脑炎的未知病毒.pdfVIP

中国疫苗和免疫 年 月第 卷第 期 · 341 · 2009 8 15 4 随机引物聚合酶链反应法鉴定2例无菌性脑炎的未知病毒 陈寅 严菊英 卢亦愚 茅海燕 张严峻 ， ， ， ， (浙江省疾病预防控制中心，杭州 310051) 摘要：目的 建立一种可应用于准确检测未知病毒的分子生物学方法。方法 2例无菌性脑炎患者的脑脊液 接 ， 种人横纹肌肉瘤细胞 收集感染细胞液 将细胞液离心去除细胞碎片 超速离心沉淀病毒颗粒后 用脱氧核糖核 ， ， ， ， 酸酶处理 提取核酸后 用随机引物进行聚合酶链反应 Polymerase Chain Reaction, PCR 扩增 将扩增产物克隆 ， ， （ ） ， 至pGEM-T Esay载体中测序 序列通过BLAST Basic Local Alignment Search Tool 最终确定未知病毒。结果 经 ， （ ） BLAST 比对证明 该病毒是人类肠道致细胞病变孤儿病毒4型。结论 成功建立了一种基于随机引物PCR 的未知 ， 病毒鉴定方法 为快速检测不明原因疾病和新发传染病病原提供了新的技术方法。 ， 关键词：无菌性脑炎 未知病毒 随机引物扩增 人类肠道致细胞病变孤儿病毒 ； ； ； 中图分类号：R373.2 文献标识码：A 文章编号：1006-916X 2009 04-0341-04 （ ） Detection of Unknown Virus from 2 Case of Aseptic Meningitis Epidemic Using Random Primer PCR Assay CHEN Yin, YAN Ju-ying, LU Yi-yu, et al. (Zhejiang Provincial Center for Disease Control and Prevention, Hangzhou 310051, Zhejiang, China) Abstract: Objective To develop a molecular biology method which can be applied to detect unknown virus fast and accurately. Methods The samples were separated from human cerebrospinal fluid by infected human rhabdomyosarcoma cells. After centrifugation and discarding the cell debris, the samples were subjected to ultracentrifugation to precipitate viral particles. The DNase treated samples were used to extract viral nucleic acids.