染色体荧光原位杂交技术检测平衡易位的临床应用ClinicalApplicationofFluorescenceinsituH.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)19(2):9一101997 染色体荧光原位杂交技术检测平衡易位的临床应用 崔英霞 商学军 王咏梅 潘淑娟 张锡然 南（京军区南京总医院全军医学检验 中心 南京 210002) 南（京师范大学生物系，南京 210097) ClinicalApplicationofFluorescenceinsituHybridization forDetectingChromosome-balancedTranslocation CutYingxta ShangXuejun WangYongmel (CentralLaboratoryofMedicine,NanjingGeneralHospitalofPLA,Nanjing210002) PanShujuan ZhangXiran (DepartmentofBiology,NanjingNormalUniversity,Nanijing210097) 染色体显带技术的建立和完善使染色体畸变的鉴别诊断等研究成为可能，从此发现了大量的染色体数目结构 的畸变 但仅靠G显带对小片段的易位、整臂易位的断裂有时鉴别困难。近些年开展的染色体荧光原位杂交 简（ 称FISH）技术 ’〔〕，是用荣光标记的已知核酸探针与中期染色体进行分子染交，通过检测杂交区域的荧光以确定 畸变染色体的精确位置，因此，为G显带难以鉴别的染色体畸变提供 了一种新的检测手段。本文报告了用染色 体特异性探针与中期染色体杂交技术，分析诊断了3例染色体平衡易位的结果。 1材 料 与 方 法 1.1研究对象 病例 1，女，24岁，因婚后 3次不明原因流产，于 1993年4月就诊。病人3次流产均发生在停经 50-55 天，无诱因。体检；身高158cm，体重50kg，发育正常，内科妇科体检均正常，配偶染色体G显带核型正常 病例 2，女，31岁，因2次不明原因流产于 1995年 3月就诊。病人2次流产均发生在停经 50天以内，无诱 因，体检：身高157cm，体重51kg，发育正常，内科及妇科体检均正常，配偶染色体G显带核型正常 病例3男.33岁，因妻不良妊娠史于1995年11月就诊 患者妻于1986年早产一男性畸形儿，尸检证实四 肢、眼、心脏多发畸形：1987年 5月停经45天做人工流产；1989年7月孕，月，B超提示胎脑积水，后引产证 实多发畸形；1990年4月停经50天，取绒毛后流产；1993年4月停经 3月胚胎停止发育，诊为过期流产后行清 宫术 体检：身高 ！72cm，体重60kg，发育正常，内科体检正常，肇丸及外生殖器发育正常，配偶染色体G显 带核型正常 1.2染色体制备及显带 采用外周血淋巴细胞制备染色体及高分辨染色体，G显带按常规方法进行 ”〔。 1.3荧光原位杂交 采用外周血淋巴制备染色体。所用探针均为生物素标记，从Cambio公司购得，参照黄浩杰c37等报道的方 法进行杂交。10川杂交液 5（0％甲酞胺，2xSSC,10％硫酸葡聚糖，500ng/川cot-1DNA,2ng/川生物素标 记的DNA探针）65℃变性 10-11min,37℃水浴孵育20--30min；同时染色体标本于70％甲酞胺 ／2xSSC内变 性2--2.5min，立即转人一201C70％乙醇中，再经70%.90%,100％乙醇梯度脱水，每次2min，空气干燥 经变 10 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1997 19卷 性过的探针加到变性的标本上，加盖玻片，橡皮胶封片，经42C2xSSC中漂洗 5min，重复3次。1xPBD 磷 酸缓冲液0.05%Tween20）中的漂洗5min。依次加人FITC/Avidin15川(5pl/ml),Anti-avidin15川(5jig/ml), FITC/Avidin15pl(5pg/ml)，两种试剂均购自Oncor公司。再加 10y1碘化丙咤 (PI）复染，加盖片，以荧光显微 镜B滤光片组合激（发滤光片460--490nm,阻滞滤光片515nm）观察后用Kodakppc1600ASA彩色胶卷照相。 2结 果 与 讨 论 2.1细胞遗传学检查结果 病