西柏利亚蓼PsGSTU1、PsCSase1、PsnsLTP基因抗逆功能分析.pdf

摘耍 I JIII I[111 11111 II I 1[III 摘要 在抗非生物胁迫方面进行研究，同时观察双价基因间是否具有协同性和叠加性：将从西 伯利亚蓼中克隆得到的基因咫疗豇卯构建植物表达载体和酵母表达载体，成功得到了转 基因烟草和转基因酵母，并对其进行生物学方面的鉴定，分析了转基因烟草耐生物和非 生物胁迫方面的功能，转基因酵母耐非生物胁迫方面的功能，结果如下： mM，20mM 不同非生物胁迫实验：种子萌发实验(0．9％，1．2％NaCI；10 NaHC03； 20％PEG6000；200CdCl2；UV-B：90 pM pW／cm2紫外线)：组培苗胁迫实验(0．6％、 0．9％、1．2％NaCI；400CdCl2)：在室温内胁迫条件下的生理生化指标测定实验 pM 性蛋白的测定)。无论从种子萌发比较、组培苗胁迫后表型比较还是胁迫后烟草生 理生化指标的测定比较，结果都显示转PsGST基因、风C勋se基因和双价基因 于对照，但并没有表现出双价基因的协同性，反而转PsCSase基因烟草耐逆境胁迫 能力最高。 经成功转入烟草基因组中并能正常转录。对转基因烟草进行如下实验：叶盘耐盐耐 mM 重金属实验(3mM，5 CuS04：200 NiCI；l ZnCl2：3 taM，400}lM00“M，200laM mM mM mM，8 CdS04；400“M，800CdCl2；100laM，200pMAICl3；1．2％NaCI；15 pM mM NaHC03)：种子萌发实验(0．9％，1．2％NaCI；10mM，20NaHC03；2001．tMCdCl2； 00肛M．200 pM 测定)，所有实验结果显示转基因烟草抗盐碱、重金属和紫外线的能力明显高于对 照。 3、对转^门止”基因烟草进行生物胁迫实验，离体接菌法将烟草炭疽病病菌和猝倒病 病菌分别接菌到转基因烟草和对照烟草叶片上，对照烟草叶片出现明显的炭疽病症 状，而转基因烟草苗与对照相比症状较轻：在猝倒病上，也出现了相似的效果，说 明外源基因咫，2也冲转入烟草中提高了其对炭疽病和猝倒病的抗性，初步验证J，该 基因在抗病原菌方面的功能。 M M M 因己成功转入INVScl中并能正常转录，5NaCI；1NaHC03，lNa2C03：400 mM mM mM，8 CdS04和lmM，3 CdCl2；3mM，5 mM，5 CuS04的胁迫下，随着 pM 胁迫时间及胁迫溶液浓度的增加，转基因酵母存活率始终高于对照，而且差别愈加 ：——垒堕些塑些丝鲨垒———————————一 pYES2．砒砰抗盐碱、抗镉和铜的能力，实验结果与转nsLTP基因烟草实验相吻 合，进一步说明