在线超声提取96-孔盘技术高通量快速测定全叶马兰中果聚糖成分 Dynamic Ultrasound-assisted Extraction and High-throughput for Analysis of Fructans from Kalimeris Integrifolia by 96-Well Format.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第3期 ChineseJournalof 397～加o 2011年3月 AnalyticalChenlistry 在线超声提取96-孑1．盘技术高通量快速测定 全叶马兰中果聚糖成分 田尚衣1’2 万泓志1 黄国辉2 杨允菲¨ 张义飞1 邵帅1 1(东北师范大学草地科学研究所，植被生态科学教育部重点实验室，长春130024) 2(东北师范大学生命科学学院生物基础实验教学中心，长春130024) 摘要采用在线动态超声提取装置对全叶马兰果聚糖成分进行提取，用效应面方法优化了在线提取条件。 mL； 提取溶剂为纯水。待测样品为5 W溶剂流速0．63mL／min，溶剂体积4．69 mg，提取条件为超声功率是496 用9争孔盘联合酚硫酸程序对果聚糖进行高通量快速检测，果聚糖的加标回收率为98．3％～105．7e／o，相对标准 rain内可分析24个样品。试剂用量较常规比色分析 偏差为2．9％～4．1％，全叶马兰果聚糖含量为17．60％。15 减少了95％。本方法快速、准确，特别适合天然植物资源生态学研究中数以百计的大样本统计调查。 关键词 全叶马兰；果聚糖；高通量分析；在线动态超声提取；96-孔盘；苯酚 1 引 言 全叶马兰(Kalimeris integrifolia)是菊科植物，其根部含有大量的果聚糖是重要的天然植物多糖，具 有抑制病原体在结肠内滋生【11、增加钙的吸收【2l、防便秘【31和降低结肠癌风险“1等特殊功效。 近年来，在线动态超声辅助提取日益受到重视嗍。以往超声辅助提取多见于静态形式，动态超声辅 助提取植物多糖并不多见。96-孔盘测试技术基于光度法【51，其多通道光路垂直照射，可在6～10S内完 成96个样品的测试。本研究采用在线超声提取与96-孔盘酚硫酸光度法联用进行全叶马兰中果聚糖的 高通量快速测定。应用效应面方法(RSM)优化了在线动态超声提取条件【6】，比较了在线提取与离线提取 对果聚糖提取产率的影响；化学比色法与9争孔盘比色法对果聚糖分析准确度及分析效率的影响。本方 法具有实验步骤少、数据准确及分析效率高等优点。适用于植物多糖研究及柱色谱分离多糖的检测； 2 实验部分 2．1仪器与试剂 集器(上海沪西分析仪器有限公司)；BT01-100／YZl515恒流泵(保定兰格恒流泵有限公司)。 g／L)的 制备：准确称取菊粉0．0500 mL；5％(m／V)苯酚。 g，用少量超纯水在60℃水浴下充分溶解并定容至50 rain后，80℃烘至恒 全叶马兰采集于松嫩草地，处于萌发期(4月)。新鲜植物样品于105℃杀青15 重。取根部粉碎，过40目筛，存放于干燥器中。 2．2实验方法 2．2．1在线动态超声提取程序准确称取0．00480O．00500 g样品装入样品腔内，按图l所示连接在 线提取装置。操作流程为：调节蠕动泵的流速及超声发生器的功率，将样品腔放置在超声探头下1cm 处固定好，连接在线提取装置并检查是否有漏液处，同时启动蠕动泵、超声发生器和时间计数器，根据时 间计数器准确定量接收样品中果聚糖提取液4．7mL。 2．2．2效应面方法(RSM)优化在线动态超声提取条件RSM