哺乳类基因工程的一些实验操作实验10X噬菌体DNA体外包装.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 9(5);44-481987 岔 二 二 二 二 二 讲 哺乳类基因工程的一些实验操作 二 二 二 二 二 二 座 二 实验 10X噬菌体 DNA体外包装 n：：：：：：：：：比： 赵 寿元 （复旦大学遗传学研究所，上海） 6．尽可能除去残留的液休，加3．6毫升新鲜配制 一、需用的菌株及其特性鉴定 的超声缓冲液，将沉淀物均匀地悬浮在溶液中，然后转 1.菌株及其基因型 入 1支干净的试管内。 (1）大肠杆菌E.coliBHB2688，基因型为：N205 超声缓冲液的配$＄-I];20mMTris·HC1pH8/1mM rec＾一r〔imm`9clts,b2,red-,Earn,Sam/r.lo EDTA/5mM ,li-疏基乙醇。 (2）大肠杆菌 E.coliBHB2690，基 因型为： 7．将试管浸在冰水中，保证在超声处理时温度不 N205recA-[rimm9`.cIts,b2,red-.Dam,Sam/r]. 超过49C。超声处理时用最小的探头、最大的功率，超 (3）大肠杆菌 E.coliK802，基因型为：hsdR+, 声处理10秒钟后间歇20-30秒钟，使溶液温度下降。 hsdM+.}gal-,met-,SUPHO 超声处理时还要防止形成泡沫。 至溶液变清、粘度下 2.鉴定 clrs基因 降时停止超声处理。 (1)BHB2688和 BHB2690各自接种在2只 LB 8.12,000rpm,49C离心10分钟，除去碎片。 培养基上。 一只置 32℃下培养，另一只置42℃下培 9．在上清液里加等体积的预冷的超声缓冲液和 养。在32℃培养的平板上挑取单菌落，接种在LB培 1/6体积的新鲜配制的包装缓冲液。 养液中，32℃培养过夜。 包装缓冲液的配$,＄I1;6mMTris·HC1pH8/50mM (2）再将培养液中生长的细菌划线接种在 2只 精胺 (spermidine)/50mM putrescine/20mMMgCl,/30 LB培养基上，分别置32℃和42℃下培养。如果细菌 mMATP/30MM 6-疏基乙醇。 只在 32℃下生长，则可用于制备包装用的抽提物。 10．把溶液分装在4℃预冷的小离心管中，每管 3.鉴定 ，cA基因 15或30微升。迅速浸入液氮，然后在一70℃中贮存 (1)在LB平板上，平行划线接种 BHB2688, 备用。 BHB2690和 K802o O.1MATP的制备法：60毫克ATP,溶于0.8毫 (2）用厚纸遮住培养皿的一半，打开培养皿盖置 升双重蒸馏水。用1MNaOH调节pH二7。加水到1 紫外线下照射。然后在犯℃下培养过夜。 毫升。分装小管，一709C贮存备用。 (3）厚纸遮挡部分的培养基上，BHB2688和 BHB 三、制备 FTL 冻（融裂解物） 269。生长，紫外线照射的培养基上则不生长。K802 不受紫外线照射的影响都能够生长。 1.LB培养液中接种 BHB2688单菌落，32℃培养 过夜。 二、制备 S 超（声处理抽提物） 2.20毫升菌液接种在 500毫升、32℃预温的LB培 1.LB培养液中接种 BHB2690单菌落，32℃培养 养液中，32℃振荡培养2-3小时。菌液OD600＝0.3,