杆状病毒表达系统的改进及IL-6在昆虫细胞内的表达和纯化.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 !! ’( )!! *’ ) 年 月 !##$ % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,(- !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 杆状病毒表达系统的改进及!#$ 在昆虫细胞内的表达和纯化 !%’()*%*+, (- ./012()3’14 56’*443(+ 784,*% /+9 :1’3-30/,3(+ (- !#$ :’(,*3+ 56’*44*9 3+ !+4*0, ;*224 L ! ! I I 姚 宁 ，姚伦广 ，阚云超 ，周文科 ，齐义鹏 L ! ! I I ， ， ， N:O *1BC N:O P,BHQ,BC R:* N,BH@?’ STOU V/BHR/ B3 WX N1HY/BC L 西南交通大学药学院，峨眉山市 $L!#! ! 中英南阳洛桑昆虫生物学联合实验室，南阳师范学院，南阳 %I#$L I 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室，武汉 I##%! ， ， L 3()/4%/ ’#+(/($1 5$#6%*#/2 7+*8+02 !(,,%1% $L!#! !#$+ ， ， ， ! !#$+H 59 :;:5H% ’(#$/ =+ (- ?$%0/ .#(,(12 :+$2+$1 :(*8+, 5$#6%*#/2 :+$2+$1 %I#$L !#$+ ， ， ， ， I 3/+/% 9%2 =+ (- @#(,(12 !(,,%1% (- =#- % 30#%$0% A)+$ 5$#6%*#/2 A)+$ I##%! !#$+ 摘 要 使用同源重组方法，在昆虫细胞内将多角体启动子驱动的JQFY 表达盒插入杆状病毒穿梭载体 Z0513 的B % 位相， 经9 轮空斑纯化获得重组穿梭载体Z0513H/C[;。然后将Z0513H/C[; 转化含转座助手质粒的C ) 0(,# 4TL#Z，获得受体菌C ) 0(,# 4TL#Z0H/C[;，由于Z0513H/C[; 保留了完整的转座结构和 互补功能，因此该菌株和原始 C ) 0(,# 4TL#Z0 一样能有效的利用 ! 各种;FAZ0 系列的载体进行转座并构建出能指示病毒繁殖和目的基因表达的重组病毒。使用红色荧光蛋白4A./3 对系统 进行了验证，结果表明重组病毒Z0H/C[;H4A./3 感染的细胞中绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白均得到了高效表达。进一步使用 该系统在昆虫细胞中高效表达并纯化了XPH$ 蛋白，为研究和应用该细胞因子提供物质基础，同时也进一步证明所改造的杆状 病毒表达系统的可靠性和实用性。 关键词 Z0H’HZ0 系统，位点特异性重组，绿色荧光蛋白示踪，白介素H$ 中图分类号 文献标识码 文