人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法的建立.pdfVIP

中国医药生物技术 2012年 10月第7卷第 5期 ChinMedBiotechnol，October2012，Vo1．7No．5 ， DOI：103969／cmba．j．issn．1673—713X．201205．005 · 论 著 · 人血清透明质酸夹心化学发光免疫 检测方法的建立 于峰，李瑞娟，李鹏聪，张鑫，孙旭东，刘宾 【摘要】 诊断。因此，为了满足国内临床需要，本研究利用 目的 建立人血清透明质酸夹心化学发光免疫检测方法。 透明质酸结合蛋白 (hyaluronicacidbindingprotein， 方法 用透明质酸结合蛋 白分别进行固相载体包被和与辣 HABP)能特异结合 HA 和 HA 分子上具有多个 根过氧物酶偶联，建立定量测定人血清透明质酸的夹心化学 HABP结合位点的特点，建立了基于夹心法原理的 发光免疫检测法，并对该方法进行方法学和临床应用性评 透明质酸夹心化学发光免疫 (CLIA)检测法。 价 。 结果 所建立血清透明质酸化学发光免疫检测法灵敏度为 1 材料与方法 0．66 L，线性范围在 1．8～1000gg／L，批 内变异系数低于 1．1 材料 1．1．1 临床样本 血清样本共计 197份，其中男 7．05％，批 间变异系数低于 8．0％，平均添加回收率为 性 129份，女性 68份，年龄在 19～81岁，全 103．1％，稀释回收率为 106．8％，与肝纤维化其他血清标志 物 IV 型胶原、III型前胶原和层黏连蛋 白的交叉反应率分 部为本院肝纤 4项检测样本。 1．1．2 主要试剂与仪器 HABP 由北京源德生物 别只有 0．19％、0．16％ 和 0．17％，样本中添加的抗凝剂及 医学工程有限公司提取并纯化 ；(HA)ELISA检测 胆红素、胆固醇、甘油三酯等物质对检测结果没有影响。辽 宁抚顺市传染病医院用该方法检测 737份样本的临床总符 试剂盒购 自美国 Corgenix公司；其他化学试剂均 合率为 98．64％；检测 197份样本透明质酸含量的结果与美 为 国产分析纯试剂；MPC一1型微孔板单光子计数 仪 [京药监械 (准)字 2005第 2400129号 (更)] 国 Corgenix试剂盒检测结果的相关性为 Y=0．855x+ 26．874 (r=0．9877)。 购 自北京源德生物医学工程有限公司。 1．2 方法 结论 该方法灵敏度高、特性好、线性范围宽，有 良好的准 1．2．1 包被发光微孔板 的制备 将 HABP溶于 确性和重复性，完全可用于临床样本的肝纤维化检测。 0．05mol／LpH 9．6的碳酸盐缓冲液，终浓度为 【关键词 】透明质酸； 肝硬化； 抗原，CD44； 化 10gg／ml：100~I／TL包被微孔板，2～8。C 过夜；弃 学发光免疫分析 去包被液 ，每-~LDH入含有 1％ 酪蛋白的 0．02mol／L wwn：cmbpnetcn 中国医药生物技术 2012 I51．346351