超痕量HRP的邻苯二胺微粒瑞利散射光谱分析新方法及其应用 Rayleigh Scattering Spectral Determination of Ultratrace Horseradish Peroxidase Based on o-Phenylenediamine Particles and Its Application.pdfVIP

V01．29 高等学校化学学报 No．10 2008年lO月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSmES 1973—1976 超痕量HRP的邻苯二胺微粒瑞利散射 光谱分析新方法及其应用 蒋治良，李建福，梁爱惠，李纪顺，汤亚芳，王素梅，张南南 (桂林工学院材料与化学工程系，有色金属及材料加工新技术教育部重点实验室，桂林541004) 摘要在pH4．8的乙酸盐缓冲溶液中，邻苯二胺(OPD)形成粒径约380nln的微粒，在392，420，445，484 和507 氨基吩嗪产物，反应体系在420，445和484lira处的Rayleigh散射光信号显著减弱．在最佳条件下，HRP浓 度在8．3×10“2—4．17×10“og／mL范围内均与445和484nln处的Rayleigh散射强度的降低值呈线性关系， 3．6×10“2 s／mLHRP和5．4×10“2s／mLHRP．该法用于辣根过氧化酶(HRP)的测定，结果满意． 关键词邻苯二胺；辣根过氧化酶；过氧化氢；瑞利散射光谱法 中图分类号0656 文献标识码A 文章编号0251-0790(2008)10—19734)4 辣根过氧化物酶(HRP)是一种重要的蛋白酶，具有广泛应用…．Lazrus【2o利用HRP的催化活性建 立了大气和雨水中的过氧化氢的检测方法．HRP的催化活性也被用于电化学研究口一J．在酶联免疫分 析中，HRP常用于标记抗原或抗体”J．HRP的测定方法有伏安法∞．4J、分光光度法∞J、荧光光度法¨J、 化学发光法【81和安培法【9J．伏安法和化学发光法具有较高灵敏度；光度法简捷但灵敏度欠佳．Rayleigh 散射光谱分析技术具有灵敏、简便、快速等特点¨¨12J，已用于痕量无机物和有机物分析．目前已建立 了一些高灵敏、高选择性的免疫和催化Rayleigh散射光谱分析新方法¨3’14J．但迄今尚未见辣根过氧化 一种简便、快速、灵敏检测辣根过氧化酶的新方法． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 nm，透过率为 LS55型荧光分光光度计(美国PE公司)，电压780V，激发狭缝和发射狭缝均为10 NaNo—ZS 设备有限公司)；PT-10型pH计(Sartorius公司)． 0．01 剂盒(酶联免疫法)购于北京北方生物技术研究所；辣根过氧化酶(HRP)购于华美生物工程公司 ．(RZ3，300U／mg)；H202标准储备液(临用新配)：取5．0mL的质量分数为30％的H202稀释至100 mL，用高锰酸钾标定，浓度为0．4940mol／L；用0．02mol／L乙酸(HAc)和0．02mol／L乙酸钠(NaAc) 溶液配制pH4．4～5．4的HAc—NaAc缓冲溶液．以上试剂均为分析纯，实验用水均为亚沸高纯水． 1．2实验过程 mL 0．01mol／L 在5mL具塞刻Jj{：试管中，加入1．0 pH为4．8的HAc．NaAc缓冲溶液，200o,L 收稿日期：2007—12-05． 资助． · 联系人简介：蒋治良．三Ij．博士，教授．主要从事纳米化学与酶免疫共振散射光谱分析研究．E-mail：zajia．s@加te．edu．cn 万方数据万方数据 高等学校化学学报 V01．29 mol／L OPD，30斗L0．4940H202，一定量的5．0rig／mEHRP，定容至3．0mL，摇匀，置于25℃水浴中 反应20 溶液作空白，测定其ltayleigh散射强度，b，求得△k。=lb—k。． 2结果与讨论 2．1方法原理 在pH