应用实时荧光定量PCR检测结直肠癌与癌旁组织中MIRNA-221的差异表达状况.pdfVIP

医药2010年第 50卷第 12期 应用实时荧光定量 PCR检测结直肠癌与癌旁 组织 中miRNA一221的差异表达状况 曾俊杰 ，孙 凯 ，吴承堂，雷尚通 ，王 伟 (南方医科大学南方医院，广州510515) 摘要：目的 分析结直肠癌与毗邻癌旁组织中miRNA一221差异表达状况。方法 常规抽提 30例结直肠癌及 对照癌旁组织中总RNA，应用实时荧光定量 PCR方法检测标本中miRNA一221的表达状况。结果 与癌旁组织相 比，结直肠癌组织中miRNA一221表达明显上调 (P0．01)。结论 实时荧光定量 PCR是一种较精确的miRNA定 量检测方法；miRNA一221可能通过转录后基因沉默机制促进结直肠癌的发生发展。 关键词：结直肠肿瘤 ；miRNA一221；实时荧光定量；聚合酶链反应 中图分类号：R735．3 文献标志码 ：A 文章编号：1002266X(2010)12-0026-03 ExpressionofmiRNA-221 iflcolorectalcarcinomaandnon．tumoroustissues byusingreal-timequantitativePCR ZENGJun-jie，SUNKai， Cheng—tang，LEIShang—tong，WANGWei (NanfangHospital，SouthernMedicalUnive~ity，Guangzhou510515，P．R．China) Abstract：0bjective ToinvestigatethedifferentexpressionofmiRNA-221incolorectalcarcinomaandadjacenton— tumoroustissues．Methods Thirtycolorectalcarcinomaandadjacentnon—tumoroustissueswerecollectedrespectivelyand thetotalRNA wasisolatedroutinely．ThemiRNA一221expressionwasdetectedbyusingreal—timequantitativepolymerase chainreaction(PCR)．Results TheexpressionofmiRNA一221wassignificantlyincreasedincolorectalcareinonlatissues thanthoseinadjacentnon—tumoroustissues(P0．01)．Conclusion Thereal—timequantitativePCRassayisanaccu— rate，rapidand less—expensivemethodtodetectmiRNA．miRNA一221couldpromotecolorectalcarcinomaoccurrenceby meansofpost—transcriptionalgenesilence． Keywords：colorectalneoplasms；miRNA-221；real—timequantitative；polymerasechainreaction 近年研究表明小分子 RNA(miRNA)对生物体生 后病理检查证实。患者 中男 18例 、女 12例，年龄 长发育和分化调控起着重要作用 ，其失衡表达亦可促 32～74(52．5±11．8)岁；结肠癌 13例 ，直肠癌 17 进多种肿瘤 的发生发展 ¨J。miRNA-221是新近发现 例。癌旁组织取 自距离癌肿5cm的肠黏膜，另切取 的一种 miRNA，可通过调控细胞增殖周期而参与肿 距离癌肿 10cm 以上肠黏膜作为正常对照。全部病 瘤的演进过程，但其在结直肠癌中的表达状况国内外 例术前均未接受化疗或放疗。标本采集后迅速放至 尚未见研究报道 。我们选用实时荧光定量 PCR 液氮 中冷冻，一80℃保存。 (Rea1．timeQ—PCR)检测结直肠癌与毗邻癌旁组织中 1．2 引物设计与合成 由GenBank查找基因序列， miR