TGF-β1siRNA对THP-1分泌细胞因子的影响.pdf

siRNA对THP．1分泌细胞因子的影响 TGF．pl 硕士生姓名： 李荟苹 指导教师： 张 或 教授 专业名称： 急诊医学 摘 要 目的：脓毒症作为危重病患者的主要死亡原因之一，具有病死率及 发病率高、发病机制复杂、缺乏特异性治疗手段的特点，而且花费巨大， 给家庭及社会造成很重的负担，因此揭示脓毒症的发病机制，找到合理 的治疗方法是急需解决的问题。目前已经证实免疫抑制及炎症反应失控 为脓毒症致机体不可逆损害的主要病生机制之一。TGF．pI作为免疫抑制 因子，可以抑制T、B淋巴细胞的增值及活化、下调自然杀伤细胞的活 性、调节单核巨噬细胞的功能及多种细胞因子如IL—l、IL一2的生成并拮 抗它们的功能，但其在炎症反应失控方面的作用机制尚未阐明，特别是 其对脓毒症相关信号传导通路的影响。IL．10可抑制单核．巨噬细胞的活 化和抗原提呈功能，阻止Th．1细胞激活的抗原提呈细胞合成细胞因子， 从而抑制免疫炎症反应。TNF．a又称恶质素，主要由单核．巨噬细胞分 泌，是一种重要的促炎因子。 本实验通过RNAi技术，抑制单核细胞内源性TGF．DI的表达，来观 0)的变化，初步探讨 察该免疫细胞分泌促炎因子(TNF．a)及抗炎因子(IL-l TGF．Dl对这两种功能相反的细胞因子的影响，从而为进一步研究TGF．DI 调节脓毒症相关信号传导通路的机制及其在炎症反应中的作用提供新方 法，为攻克脓毒症这一顽疾寻找新思路。 方法：l、瞬时转染外源性siRNA进入人单核细胞白血病细胞株 THP．1，沉默该细胞内源性TGF．DI基因的表达。将体外培养的细胞随机 ④空白对照组(常规培养)。转染24小时后收集各组细胞，涂片，在荧光 显微镜下观察细胞转染效果。用试剂盒提取细胞总RNA，RT．PCR技术 检测TOF．Dl在基因水平的沉默效果。转染48小时后收集各组细胞，用 试剂盒提取细胞总蛋白，BCA蛋白定量，WB技术检测细胞TGF．13l蛋白 抑制情况。2、ELISA法检测各组细胞培养基中TNF．Q及IL．10浓度变化。 l 3、数据结果应用SPSS6。0统计软件进行分析，P0．05为有统计学差异。 结果：①在荧光显微镜下观察，细胞内有绿色荧光，50nMsiRNA组 IL．10各组间无明显变化，P0．05，无统计学意义。 结论：①基于RNAi技术，利用阳离子脂质体介导，瞬时转染人单 核细胞株THP．1外源性TGF．Dl干扰片段，可在基因及蛋白水平成功抑 O的产生无影响。 TGF．13l对抑炎因子IL．1 关键词：转化生长因子pl 小干扰RNA脓毒症 单核细胞 肿瘤坏死因子a 2 of small Effects factor·-131 transforminggrowth onthe RNAtransfection interference cytokines 1 -1CellS eSslsecretion“THP-1retlonleoI c Master candidateHuiping-Li degree Zhangyu Supervisor：Professor Medicine