简并引物在基因克隆技术中的应用.pdfVIP

遗 传 HEREDITAS(Beijing)25(2)：201～204，2003 技 术 与 方 法 简并 PCR技术及其在基 因克隆中的应用 王洪振 ，周晓馥 ，宋朝霞 ，刘文广 ，曾宪录 (1．东北师范大学遗传与细胞研究所 ，长春 130024；2．吉林师范大学生物系 ，四平 136000) 摘 要 ：本文简要介绍简并 PCR技术 ，包括什么是简并 引物 ，如何设计简并 引物 ，进行简并 PCR 的反应条件 ，应用 简并 PCR获得全长基 因的方法和简并 PCR技术 的应用范 围，并对简并 PCR技术 的局 限性及其新进展进行讨论 。 在此基础上 ，简述基因的克隆策略 以及简并 PCR技术在基 因克隆中的应用 。简并 PCR技术是寻找和发现 “新 ”基 因或蛋 白质家族新成 员 的一种非常有用 的工具 。 关键词 ：简并 PCR；简并引物 ；基 因克隆 中图分类号 ：Q75 文献标识码 ：A 文章编号 ：0253—9772(2003)02—0201—04 DegeneratePCR and ItsApplication in GeneCloning W ANG Hong—Zhen ’，ZHOU Xiao—Fu，SONG Zhao—Xia ，LIU W en—Guang ，ZENG Xian—IU (1．InstituteofGeneticsandCellBiology，NortheastNormalUniversity，Changchun130024，China： 2．DepartmentofBiology，JilinNormalUniversity，Siping 136000，China) Abstract：DegeneratePCR isintroduced inthispaper，including whatisdegeneratePCR ，how tO designdegenerate primers，how tOoptim izedegeneratePCR param eters，how tOapplyingdegeneratePCR tOobtainfuU— lengthgeneand whichfieldscanapplydegeneratePCR．ThelimitsandrecentadvancesofdegeneratePCR arealsodiscussed．Basedonthis introduction，strategiesofgenecloningandapplicationsofdegeneratePCR ingenecloning aresummarizedinbrieLDegener— atePCR isaveryusefultoolforsearchinganddiscoveringnew genesandnew m embersofaproteinfam ily ． Keywords：degeneratePCR；degenerateprimer；genecloning 在生命科学飞速发展 的今天 ，新基 因的发现及其功能 的 合酶链反应技术 ，其原 理是模拟 DNA复制反应 ，通过 与特 研究一直是生命科学研究中的热点 。尤其随着 人类 基 因组 定 DNA 区域两端互补 的寡核苷 酸 引物 ，在反应管 中选择性 计划 即将完成 ，以及一些模式生物如酵母 、线虫 、果蝇 、小 鼠、 地复制合成介于两 引物之 间的 DNA 片段 ，因此 ，又被 称为 拟南芥、水稻和一些原核生物 的基 因组 的全序列 已经被测定 DNA 的体外扩增 。PCR 技术 已经成 为分子生