猪圆环病毒2型ORF2_猪白介素2嵌合基因_省略_载体的构建_表达及在小鼠体内的.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 猪圆环病毒2 型ORF2/ 猪白介素2 嵌合基因真核表达 载体的构建、表达及在小鼠体内的免疫效果研究 * 张 闫若潜，贾松涛，吴志明 ，张志凌， 健，赵雪丽 (河南省动物疫病预防控制中心，河南 郑州 450008) 摘 要：为了研究猪圆环病毒2 型(PCV2)核酸疫苗，本研究采用重叠延伸PCR (Splicing by overlap extension- PCR ，SOE-PCR) 方法通过一基因柔性接头(linker) (G4S) 3 将PCV2 的ORF2 全长基因和猪白介素2 成熟肽基因 (PoIL-2) 构建成PCV2-linker-PoIL-2 嵌合基因并克隆入 pcDNA3 .1 (+) 真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒 (rpcDNA3 . 1/PCV2-linker-PoIL-2) 转染COS-7 细胞，分别采用PCV2 抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2 蛋白ELISA 试验方法检 COS-7 细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2) 生物学活性；提取rpcDNA3 .1/PCV2-linker- PoIL-2 和只含PCV2 ORF2 基因的重组表达质粒pcDNA3 .1/OFR2 (rpcDNA3. 1/OFR2)免疫BALB/c 小鼠并检 其免 ：成功构建了 ； 疫效果。结果表明 PCV2-linker-PoIL-2 嵌合基因及其 pcDNA3. 1(+) 重组表达质粒 rpcDNA3. 1/ PCV2-linker-PoIL-2 在 COS-7 细胞浆内进行了表达，表达的rCap-linker-PoIL-2 可分别与抗PCV2 和抗PoIL-2 蛋白 抗血清发生特异性免疫反应，表明rCap-linker-PoIL-2 蛋白具有 Cap 蛋白和 PoIL-2 蛋白的双重生物学活性； rpcDNA3 . 1/PCV2-linker-PoIL-2 质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2 抗体，且其诱导的抗体水平明显 高于rpcDNA3 . 1/OFR2 。 关键词：猪圆环病毒2 型；猪白介素2 ；嵌合基因；核酸疫苗；免疫效果 猪 圆环病毒 2 型(Porcine circovirus type 2 ， sion-PCR ，SOE-PCR) 方法通过一基因柔性 linker 将 PCV2)属于圆环病毒科，圆环病毒属，为无囊膜单 PCV2 的 ORF2 全基因(PCV2/ORF2) 与猪白介素 2 链环状DNA 病毒，大小约为 1.7 kb ，编码2 个 要 (Porcine interleukin-2 ，PoIL-2) 成熟肽基因构建成 的开放阅读框架：ORF1 和 ORF2 [1] 。ORF2 基因是 PCV2-linker-PoIL-2 嵌合基因，并转入pcDNA3.1 (+)载 ， PCV2 的重要抗原基因 编码病毒的衣壳蛋白(Cap 体构建重组表达质粒 pcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 ， 蛋白) ，在 Cap 蛋白上存在抗原表位，具有免疫原 将重组表达质粒在真核细胞COS-7 中进行表达，对 性，因此ORF2 基因成为建立 PCV2 特异性血清学 表达结果进行了鉴定，为进一步研制 PCV2 基因工 [2] 检测方法及核酸疫苗研究的目的基因 。白细胞介 程核酸疫苗奠定基础。 素2 (Interleukin-2 ；IL-2)能诱