2.2 土壤中分解尿素细菌分离与计数.pptVIP

3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。 4. 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。 5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例6)。 （三）微生物的培养与观察 5～7d 3～4d 1～2d 培养时间 25～28℃ 放线菌 25～28℃ 霉 菌 ①每隔24h统计一次菌落数，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 ②仔细观察并记录菌落的（形状、大小、隆起和颜色等方面）特征。 30～37℃ 细 菌 观察时间 培养温度 微生物 的种类 大小、形状（圆形，假根状，不规则状） 表面特征（光滑，皱缩，颗粒状，龟裂状，同心圆状） 隆起形状（扩展，台状，凹面，凸面，乳头状） 边缘情况（整齐，波状，裂叶状，锯齿状） 表面光泽（无光泽，金属光泽，闪光） 质地（油脂状，膜状，粘脆） 颜色、透明度 [一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落： 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 2.样品的稀释操作是否成功： 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 3.重复组的结果是否一致： 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要分析产生差异的原因。 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝培养基上典型特征 （一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 培养基的配制 ：最好用蒸馏水 培养基的灭菌: 可先灭菌再倒平板 取土样：可事先采取措施使土壤中的尿素细菌 富集一些。 检测：酚酞的灵敏度不 如酚红，因此建 议最好使用酚红， 否则效果不明显。 （未涂布接种） （涂布接种） 第二天 第一天 牛肉膏蛋白胨 培养基 选择性培养基 平板细菌数（土壤稀释度） 培养基 类型 日期 本课题知识小结: 2.反刍动物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能以尿素作唯一氮源。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。 提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。 尿素分子的立体结构 (一)筛选菌株 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌 培养基配方三 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4?7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 培养基配方二 KH2PO4 3g MgSO4?7H2O 3g NaNO3 2g 葡萄糖 10.0g 尿素 3.0g