枯草芽孢杆菌分离试验.pptVIP

微生物设计性实验 第六组 配方： 牛肉膏 1.0g 蛋白胨 2.0g 氯化钠 1.0g 可溶性淀粉 2.0g 琼脂 4.0g 蒸馏水 200ml 调整PH值至 7.2 3.1 选择培养基 本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。 配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。 3.2 溶液或试剂 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 可溶性淀粉 琼脂 碘 碘原液 碘化钾 可溶性淀粉 磷酸氢二钠 柠檬酸 氯化钴 重酪酸钾 0.01NHCL 3.3 仪器或设备 平板培养皿 试管 三角瓶 烧杯 称量纸 高压蒸汽灭菌锅 干燥箱 无菌吸管 无菌培养皿 酒精灯 接种钩 滴管 1 制备土壤稀释液 选好采样点 ，去土表面5cm，去5-15cm处，用无菌器具规范采样几十克。记录采样时间，地点环境等，以备考证。 采样后应尽快分离 。使土样与水分充分混合，将细胞分散，放入99ml无菌水三角瓶中， 80度水浴处理1小时候取出。 用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后从该试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水试管中，以此类推。制成五分不同稀释度的土壤溶液。 2 涂布 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上 3 、4、5、三个稀释度，然后分别由3、4、5三管土壤稀释液中各吸取0.2ml，小心的滴在对应的平板培养基表面中央位置。 用无菌涂布器涂布，均匀分布，在室温下静置5—10分钟，使菌液浸入培养基。 3培养 将淀粉培养基平板倒置于30摄氏度的培养箱中培养 1-3 d 4 初筛 观察菌落表面粗糙不透明，呈污白色或微黄色，将这样的菌种单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基上，置于30度的培养箱中培养，若发现有杂菌，需要再进行分离纯化。（若果不能用肉眼更好的观察，可以对其进行革兰氏染色，在显微镜下观察，与标准菌种比较） 测定淀粉酶活 2 方法步骤 1 分离到枯草芽孢杆菌菌的株数 2 枯草芽孢杆菌产酶活性大小及形态观察鉴定结果。