细胞内分子检测及成像技术的研究.pdfVIP

第圆愿卷 第员期 深圳大学学报理工版 灾燥造郾圆愿 晕燥郾员 圆园员员年员月 允韵哉砸晕粤蕴 韵云 杂匀耘晕在匀耘晕 哉晕陨灾耘砸杂陨栽再 杂悦陨耘晕悦耘 粤晕阅 耘晕郧陨晕耘耘砸陨晕郧 允葬灶援 圆园员员  文章编号：员园园园 圆远员愿（圆园员员）园员 园园园员 员远  特稿 【光电工程】 细胞内分子检测及成像技术研究 牛憨笨，陈丹妮，尹摇 君 （深圳大学光电工程学院，光电子器件与系统教育部重点实验室，广东省光电子器件与系统重点实验室，深圳缘员愿园远园） 摘摇 要：针对复杂生物学系统的研究和观测，指出对活体细胞内的分子及其相关事件，以高时空分辨 率实现可视化、跟踪和定量处理，采用远场荧光成像是目前细胞内分子检测及成像的主要工具援 在述评的 基础上，介绍该课题组在活体细胞内分子检测及成像中的荧光显微成像和非标记检测技术的研究进展援 围 绕提高荧光显微成像分辨率，研究图像信息获取速率高的宽场成像方法，包括结构光照明和单分子定位显 微援 在结构光照明显微研究中，采用可编程的数字微镜器件代替需要精确移动的光栅对生物样品进行显微 成像，获得了超分辨显微成像；在单分子定位显微成像研究中，搭建单分子定位显微成像系统，实测分辨 率达到源愿 灶皂，并获得了匀藻蕴葬 细胞突起中微丝束结构的纳米分辨图像；针对厚样品成像时存在的荧光串扰 难题，提出利用双波长空间非相干光干涉照明，理论分析证明，其可实现厚度为猿缘 灶皂半高全宽的单一薄 层的轴向选择性激发援 在非标记检测成像技术方面，围绕相干反斯托克斯拉曼散射（糟燥澡藻则藻灶贼 葬灶贼蚤 杂贼燥噪藻泽 砸葬皂葬灶 泽糟葬贼贼藻则蚤灶早，悦粤砸杂）方法中存在的问题展开研究援 为获得完整的物质分子悦粤砸杂光谱，利用飞秒激光 脉冲泵浦孕悦云获得超连续谱激光输出同时作为泵浦光和斯托克斯光，实现超宽带时间分辨悦粤砸杂光谱探测 和显微成像技术；通过数值模拟获得优化超连续谱激光输出的时谱结构的实验条件，初步实现了满足实验 所需的杂悦激光光源；通过调节探测光脉冲与杂悦激光脉冲之间的时间延迟实现时间分辨悦粤砸杂，达到有效 抑制非共振背景噪声，提高系统探测灵敏度的目的援 利用超宽带时间分辨悦粤砸杂光谱探测和显微成像技术， 原员 原员 获得多种有机溶液在猿愿苑 耀源 园怨圆 糟皂 范围内，光谱分辨率达员源 糟皂 的不同分子的悦粤砸杂光谱信号；通过 分析探讨实现超分辨悦粤砸杂显微成像技术的途径，提出利用双探测光实现纳米分辨的方案援 未来研究方向， 在荧光显微方面，将结合双波长空间非相干光干涉照明和轴向纳米定位，实现完整细胞三维纳米分辨荧光 成像，通过发展高量子效率的小分子荧光开关材料及高灵敏度高帧频的探测器，将单分子定位显微应用到 活细胞三维纳米成像和分子追踪上；在非标记成像方面，将重点发展基于 悦粤砸杂原理的单分子检测和纳米 成像方法，尤其是基于改进后的超连续谱的超宽带悦粤砸杂光谱技术和纳米分辨的悦粤砸杂显微技术援 关键词：信息光学；超分辨显微成像；远场荧光成像；结构光照明；单分子定位；相干反斯托克斯拉 曼散射；纳米分辨；分子振动谱；超连续谱光源 中图分类号：匝远猿员；韵源猿苑摇 摇 摇 摇 文献标识码：粤 里进行试验而获得的援 随着对生物大分子功能研究 员摇 研究背景 的深入，我们面临的挑战是要在活体细胞这个生物 大分子展开生命活动的大环境中研究其性质，因为 随着人类基因组计划的完成，人们从基因的结 ① 生物大分子在细胞内形成复杂的多分子复合物， 构研究转向功能研究，即系统地研究基因载体（生 生化方法缺少天然状态下完整复合物的功能研究和 物大分子，如 阅晕粤、砸晕粤 乃至蛋白质）的功能及 观察；② 生物大分子往往通过调节亚细胞器的功 相互作