诱导剂对工程菌表达重组目的蛋白的影响_百替生物.pdfVIP

诱导剂对工程菌表达重组目的蛋白的影响 摘 要： 摘 要： 摘摘 要要：： 观察诱导剂对工程菌发酵及重组目的蛋白表达的影响，从而选取最佳诱导表达条件。本文主 要阐述了几种诱导剂对工程菌发酵菌体密度以及重组目的蛋白表达量的影响，分析了不同诱导剂诱导 表达重组蛋白的特点及存在的问题。同时着重介绍了阿拉伯糖做为诱导剂对重组目的蛋白表达量的影 响，研究得到工程菌发酵的最优条件，为阿拉伯糖作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化 生产提供了有益的参考和借鉴。 关键词： 关键词： 关关键键词词：： IPTG ; 乳糖；阿拉伯糖；诱导；发酵 近年来，重组大肠杆菌的高密度发酵是现代基因工程产品大规模生产的重要技术。采 用高密度发酵技术，提高菌体的发酵技术，提高菌体的发酵密度，最终提高产物的比生产 率，不仅可以减少培养体积、优化下游分离提取，还可以缩短生产周期、降低生产成本， 从而极大地提高在市场上的竞争力。然而在研究高效发酵过程中，人们往往会遇到表达效 率难以得到最大限度的提高与产率较低等问题。在众多影响因素中，诱导剂对于外源基因 高效、稳定的表达起着非常重要的作用。由于Lac 启动子是使用最早、研究最详细的启动 子之一，所以目前用于诱导重组蛋白表达的诱导剂主要是IPTG和乳糖，而对阿拉伯糖诱 导重组蛋白表达的研究尚少。但有文献报道,Lac 启动子的控制很不严密,在无诱导剂IPTG 的情况下可有较高的表达。而阿拉伯糖(Ara)启动子是一个控制较严密且具较高表达水平 的启动子将得到普遍应用。 1、操纵子类型及调控类型 原核生物基因表达调控主要发生在转录水平上，转录调控的基本单元是操纵子。 1.1 操纵子的概念 根据操纵子学说，很多功能上相关的结构基因在染色体上串连排列，由一个共同的控 制区来操纵这些基因的转录。包含这些结构基因和控制区的整个核苷酸序列就称为操纵 子。 1.2 乳糖操纵子——可诱导负调控 乳糖操纵子的结构：由启动子（P）、操纵基因（O）、调节基因、结构基因所组成。 II 操纵基因II编码一个可扩散的分子,引起基因的阻遏。以后这种分子被证明为蛋白质,现在 称之为阻遏蛋白。阻遏作用并不是绝对的,即使在阻遏情况下,每个细胞也有少数拷贝的β 半乳糖苷酶及半乳糖苷透过酶。当供给细胞以乳糖时,lac 操纵子即被诱导,一个诱导物分子 结合在阻遏蛋白的特异部位上,引起阻遏蛋白构象的改变,结果使阻遏蛋白从操纵基因上解 离下来。在此系统中的诱导物并非乳糖本身,而是乳糖的同素异形体,称为异乳糖。乳糖进 入E.coli 细胞,被转化成异乳糖。异乳糖与阻遏蛋白结合后,它们即从操纵基因上解离下 来,lac 操纵子基因即开始表达,β半乳糖苷酶的浓度可以增加1000倍之多。 1.3 阿拉伯糖操纵子——可诱导正调控 service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm sseerrvviiccee@@110000bbiiootteecchh..ccoomm 细菌中有一个阿拉伯糖操纵子在葡萄糖馈乏时它能利用阿拉伯糖作为能源。阿拉伯, , C C 糖C基因编码一种CC蛋白,它能激活阿拉伯糖BAD 操纵子的转录,操纵子由araB,araA及 araD基因组成。C 蛋白必须与阿拉伯糖形成复合物,才能完成调控,因此只有当底物存在时, , , C 酶才能生成。与乳糖操纵子相似阿拉伯糖操纵子对葡萄糖很敏感因此除阿拉伯糖及 蛋 白外,它也被AMP 及CAP 控制。两种激活剂,C 蛋白及CAP 如何调节一个操纵子呢? 这个 机理比较复杂,但是可以理解。C蛋白既是激活剂又是阻遏物,而且它以两种不同方式作为 C 3 , araI,araO1 araO1 阻遏物。 蛋白在阿拉伯糖操纵子中的 个不同部位上结合控制 及 区。 2 几种诱导剂诱导重组目的蛋白表达的研究 2.1